RNTEC/HL-025 是从大鼠正常气管组织中分离培养的永生化上皮细胞系，属于正常人气管上皮细胞（Normal Rat Tracheal Epithelial Cells, RNTEC）的一种标准化细胞模型。其形态呈典型的上皮细胞特征，贴壁生长时表现为铺路石样或多边形单层排列，细胞质丰富，细胞核清晰。该细胞系通过病毒转染（如 hTERT 端粒酶逆转录酶）实现永生化，保留了正常气管上皮的生物学特性，如表达细胞角蛋白（CK18、CK19）、紧密连接蛋白（ZO-1）等上皮标志物，且不具有致瘤性，适用于正常生理功能研究及病理模型对照。
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培养基与环境
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推荐培养基：采用专门的气道上皮细胞培养基（如 SAGM 或 RNTEC 专用培养基），含胎牛血清（FBS，5%~10%）、表皮生长因子（EGF）、胰岛素、转铁蛋白等生长因子，以及双抗（青霉素 100 U/mL + 链霉素 100 μg/mL）。
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培养条件：37℃、5% CO₂恒温培养箱，湿度维持在 95% 以上，避免培养基快速蒸发导致 pH 值波动。
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传代与冻存
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传代时机：细胞融合度达 80%~90% 时进行传代，采用 0.25% 胰酶 - EDTA 消化液（含 0.02% EDTA）消化 1~2 分钟，待细胞变圆后及时终止消化，吹打制成单细胞悬液，传代比例建议 1:2~1:3。
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冻存方法：冻存液配方为 90% FBS + 10% DMSO，按每管 1×10⁶~5×10⁶细胞密度分装，经程序降温盒（-80℃过夜）后转入液氮保存，避免细胞因温度骤变死亡。
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质量控制
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污染检测：定期通过显微镜观察培养基是否浑浊、细胞形态是否异常，结合支原体检测试剂盒（如 PCR 法）排除微生物污染。
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表型验证：通过免疫荧光或流式细胞术检测上皮标志物（如 CK19、E-cadherin），确保细胞未发生间充质转化（EMT）；同时检测是否表达 Clara 细胞分泌蛋白（CC10）等气道特异性蛋白，确认细胞来源的正确性。
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呼吸系统毒理学研究
RNTEC/HL-025 可用于评估空气污染物（如 PM2.5、香烟烟雾提取物）、职业粉尘或化学毒素对气道上皮的损伤机制。例如，通过检测细胞毒性（MTT 法）、氧化应激指标（ROS 水平）或炎症因子（IL-6、IL-8）分泌，分析有害物质对气道屏障功能的影响。
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气道疾病模型对照
在**、慢性阻塞性肺疾病（COPD）或肺纤维化研究中，该细胞系可作为正常对照，与病理状态下的气道上皮细胞（如永生化的病变细胞系）进行差异分析。例如，比较正常与炎症刺激下的紧密连接蛋白表达变化，探讨气道高反应性的分子机制。
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药物递送系统评价
利用 RNTEC/HL-025 的单层上皮屏障特性（可通过跨上皮电阻 TEER 值评估），模拟呼吸道黏膜屏障，测试吸入型药物（如纳米颗粒、脂质体）的渗透性和生物相容性，为药物剂型优化提供体外数据。
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病毒感染与宿主相互作用
作为呼吸道病毒（如流感病毒、鼻病毒）的易感细胞模型，可研究病毒黏附、侵入及复制机制，或评估抗病毒药物（如奥司他韦）的抑制效果。
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特性限制：尽管通过永生化实现了无限增殖，RNTEC/HL-025 仍可能随传代次数增加出现轻微表型漂移（如生长速率减慢），建议传代次数控制在 15~20 代以内，并定期进行表型验证。
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种属差异：大鼠气道上皮与人类存在一定差异（如纤毛细胞比例、黏液分泌细胞类型），在转化医学研究中需结合人源细胞（如 NHBE 细胞）或动物模型（如大鼠吸入暴露实验）综合分析。
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培养细节：避免使用含 Ca²⁺浓度过高的培养基，以防诱导细胞分化；传代时消化时间不宜过长，以免损伤细胞表面受体影响后续实验（如病毒感染实验）。
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案例 1：某团队利用 RNTEC/HL-025 研究电zi烟烟雾冷凝物（CSC）对气道上皮的毒性，发现 CSC 可剂量依赖性降低细胞活力，并通过激活 NF-κB 通路诱导 IL-8 分泌，为电zi烟的呼吸道损伤机制提供了证据。
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案例 2：在构建气道上皮 - 免疫细胞共培养模型时，RNTEC/HL-025 与大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）共培养可模拟过敏原（如尘螨提取物）诱导的 Th2 型免疫反应，用于过敏性**的早期炎症研究。
总之，RNTEC/HL-025 作为标准化的正常大鼠气道上皮细胞模型，在呼吸毒理、疾病机制及药物研发中具有重要价值，其应用需结合实验目的严格控制培养条件，并通过多模型验证提升数据可靠性。
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