蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍

【GB/T 5009.5—1985】

食品中蛋白质的测定方法

　　本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。
　　1　原理
　　蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。
　　2　试剂
　　所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。
　　2.1　硫酸铜。
　　2.2　硫酸钾。
　　2.3　硫酸。
　　2.4　2%硼酸溶液。
　　2.5　混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。
　　2.6　40%氢氧化钠溶液。
　　2.7　0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。
　　3　仪器
　　定氮蒸馏装置：如图所示。
　　（图略）
　　4　操作方法
　　4.1　样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20ml水。放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。
　　4.2　按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。
　　4.3　向接收瓶内加入10ml2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。
　　同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作。
　　4.4　计算
　　
　　式中：X——样品中蛋白质的含量，%；
　　V₁——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
　　V₂——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；
　　N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；
　　0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；
　　m——样品的质量(体积)，g(ml)；
　　F——氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。
　　附加说明：
　　本标准由国内卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫生部食品卫生监督检验所归口。
　　本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。

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