总膳食纤维(TDF)的国标测定方法(符合AOAC)
空白实验应该在整个实验过程中进行,*后要从结果中扣除以去掉试剂等因素对结果的影响。将1克样品,称重精度到0.1毫克,在400毫升的烧杯中,混合到50毫升PH为6的磷酸缓冲溶液中,加磁力搅拌子,加100微生的热稳定的α-淀粉酶溶液,彻底混合,盖上铝箔。放到100度的水浴中,让样品温度保持在95—100度保持15分钟,控制好温度,然后从水浴中移出,冷却到室温。
用10毫升的0.275N的氢氧化钠溶液调节PH到7.5,向GDE中添加冷水将温度降到60度,加100微升的蛋白酶溶液(50毫克放在1毫升磷酸盐缓冲液中).烧杯盖上滤箔连续搅拌的情况下在60度时培养30分钟。冷却到室温,用0.325N的盐酸调节PH到4.0—4.6,用PH计控制PH值。
添加300毫升的淀粉葡(萄)糖苷酶( 葡萄糖淀粉酶 )溶液,盖上铝箔在连续搅拌的情况下60度水浴培养30分钟。拿掉搅拌子,280毫升的95%的乙醇预热60度,在室温下沉降60分钟。完全干净的玻璃坩埚,放在525度的马弗炉烘干1小时,冷却到室温,用水清洗,在空气中晾干。
添加0.5克的硅藻土,玻璃坩埚在130度的烘箱中恒重一个小时,精度0.1毫克。同硅藻土一起称重并放在CSF6 (FIWE6)的过滤器中,利用真空。用漏斗转移酶消解完的沉淀物,滤出液用导管进行收集。
用20毫升的78%的乙醇溶液洗涤沉淀物3次,10毫升的95%的乙醇溶液洗涤2次,10毫升的丙酮溶液洗涤2次。如果胶状的滤膜使的过滤能力下降,保持液体状态,用细微的空气来吹表面(仪器上操作),整个清洗过程需要半个小时。
在105度的烘箱中(70度的真空箱中)将玻璃坩埚连同沉淀物和硅藻土一起烘干一个晚上,冷却到室温,称重精度为0.1毫克。沉淀物的重量是*终的重量减掉坩埚的重量和硅藻土的重量(需要的重复样)。
其中一个沉淀物的样用凯氏方法分析不能消化的蛋白含量(N*6.25),**个沉淀物的样在525度的马弗炉中烘干5个小时,在干燥箱中冷却称重(精度0.1毫克),灰份的重量是前步的总重量减掉坩埚和硅藻土的重量后剩下的重量。
计算
%空白中的蛋白百分含量(SB)=空白中的蛋白含量/空白的残留量*100
%空白中灰分含量(CB)=空白中的灰分量/空白的残留量*100
空白量=空白中的残留物*[1-(PB+CB)/100]
%样品的蛋白含量(SP)=样品中的蛋白量/样品残留物量*100
%样品灰分含量(SA)=样品中灰分量/样品残留物量*100
%TDF={残留物量-[(PC+CC)*残留物量/100]-空白量}/样品重量*100
简化为:
%TDF=[残留量*(100-PC-CC)-空白量]/样品重量
注:这里的残留量是指重复空白或者样品的所获得的平均残留量 这里的样品量是指两个样品的平均重量。
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