对于膜蛋白研究人员来说,这两年真是好消息不断,去年有膜蛋白表达系统上市,今年则看到了新颖的ProteoExtract跨膜蛋白抽提试剂盒(简称为TM-PEK)。
膜蛋白通过许多疏水氨基酸残基锚定在膜结构里面,因而很难溶解在水性缓冲液系统中。为了制备膜蛋白样品,传统的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。但去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构,妨碍了膜蛋白的功能研究。
默克Novagen推出的TM-PEK是一种新颖的膜蛋白制备试剂盒。它是用基于化学而非去污剂的方法来抽提膜蛋白,不需要超声破碎、剧烈震荡、超速离心或高温孵育,这样,目的蛋白受损的几率就大大降低。而得到的蛋白组分适用于各种常见的蛋白分析,如活性分析、天然和变性的凝胶电泳、WesternBlot、**沉淀和质谱等等。
TM-PEK的抽提方法也很简单,只有两步。**步,利用抽提缓冲液1来透化细胞或匀浆的组织,通过离心将可溶(胞质)组分与不可溶(膜)组分分离开。**步,利用抽提缓冲液2A或2B将膜蛋白从脂双层中抽提出。抽提缓冲液2A与2B的区别在于主角不同,分别为TM-PEK试剂A和TM-PEK试剂B,不过Novagen并没有说明这两者的具体成分。抽提缓冲液2A非常温和,适于脆弱的蛋白复合物。相比之下,2B则更为高效,适用于那些难对付的跨膜蛋白,特别是有多个跨膜区的顽固分子。哪怕是有7个跨膜区的Frizzled-4蛋白也能轻松搞定。你可以通过实验摸索,根据目的蛋白的特点和下游应用来二选一。
看似比登天还难的膜蛋白抽提就这样被TM-PEK轻松搞定了。这样的新产品,也当之无愧成为2009生命科学十大**产品。就读者关心的一些问题,采访了默克公司**的技术专家何煜女士。
TM-PEK试剂盒是如何保障抽提跨膜蛋白的活性的?
默克:这是默克专有技术秘诀,不便说明。但是试剂盒中选用的试剂是极其温和的,没有去污剂类成分,有利于蛋白活性与蛋白复合物的保留,与传统方法有明显不同。
TM-PEK试剂盒目前的市场反应如何,用户评价如何?
默克:选用这个试剂盒的用户主要有两方面高要求:多次跨膜蛋白的制备和膜蛋白复合物的制备,不仅要特异富集还要保留活性、得率高。同时,试剂盒要求的起始细胞材料量较少,不需要超高速离心机、操作简便等优点,也使做这类实验的门槛降低。以上这些特点都得到了用户的肯定。
对于**次使用TM-PEK试剂盒的用户来说,在摸索试验上你们有什么建议?
默克:这个试剂盒的操作流程经过很好地标准化,一般不需要用户做很多调整就能达到满意的效果。而试剂盒中的bufferA或Buffer B的选择,增加了用户富集不同膜蛋白的灵活性。
在蛋白质组学方面,默克在2010年还有什么新的产品推出吗,可以预告一下吗?
默克:糖基化研究正成为信号通路和**研究的新热点,默克新推出的ProteoExtract GlycopeptideEnrichment(货号72103)可以特异高效地富集糖基化肽,使低丰度的糖肽可以方便地用于下游质谱分析。
WideScreen是默克*新推出的一系列基于LuminexxMAP(又称液相芯片)技术平台的生物标志物及信号通路蛋白检测产品,该类产品结合了荧光编码微球技术和双抗体夹心技术的双重优势,可以在一个微量液态反应体系中同时检测多项指标,真正实现了多靶点同步分析。