支原体污染常常被称为宝贵细胞系的“秘密入侵者”或“沉默的杀手”,它在许多实验室中很常见,是涉及哺乳动物细胞培养的科学家面临的主要问题。由于支原体感染能影响几乎每一个细胞参数,所以很多研究都强调了常规筛选研究细胞系的需要,以确保观察到的结果不被污染所损害。
研究表明,支原体感染能耗尽营养物,促进代谢积累,导致pH改变,诱导或抑制细胞因子表达,并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态。支原体很难检测,因为细胞体积小,种类繁多,培养的混浊度以及对加富培养基的需求有限。此外,某些种类/菌株可能是细胞侵入性的。基于上述原因,开发一种针对支原体的快速可靠的分子检测颇具挑战性。
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欧洲细胞库(ECACC)规定,“支原体感染比**和**感染更为隐蔽。支原体污染很难检测,需要使用专门技术。这些检测应当成为常规和定期质量控制筛查步骤中的一部分。”美国国立卫生研究院(NIH)在一封关于细胞错误鉴定和交叉污染的***中,推荐实验室遵守细胞培养良好规范(GCCP)指南。这包括在实验室引入新细胞系时,需要检测支原体的质量保证制度,接着进行常规筛查,以确保它们无支原体污染。
Applied Biosystems?MycoSEQ?支原体监测试剂盒或MycoScan试剂盒,是利用实时定量PCR检测支原体污染的快速方法。通过密集的生物信息学和高度优化的多重引物设计,分析能实现高度特异且**的支原体种类检测,并协助阻止其它密切相关种类的检测。在5小时内提供结果,此试剂盒是检测基础研究中所使用的宝贵细胞系的真实性的关键工具。
Myco Scan试剂盒的成分包括:Power SYBR?Green预混合液、分析混合液、抑制对照、阳性对照、阴性对照以及检测建立和数据分析的完整方案。
MycoScan试剂盒有着轻松的流程,能在5小时内获得结果(图1),便于细胞系的常规筛查。此外,试剂盒在设计扩增引物和反应条件时利用了密集的生物信息学分析,能够检测超过90种支原体种类。MycoScan试剂盒在每个反应的检测极限低于10个拷贝(图2)。解离曲线实现了结果的多参数分析。它是支原体特异的,不会检测从相近或不相近的物种中纯化而来的DNA。
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图1. 轻松的流程。MycoScan试剂盒在5小时内带来结果。
图2. Myco Scan试剂盒提供了低于10CFU/mL的检测水平。解离曲线分析实现了结果的多参数分析。
Myco Scan试剂盒是为与PrepSEQ? 1-2-3支原体样品制备试剂盒的共用而优化的,后者采用磁珠分离技术从哺乳动物细胞系中提取支原体DNA。PrepSEQ?1-2-3试剂盒能从科研细胞系、干细胞系及细胞和组织**样品中提取支原体基因组DNA。在PrepSEQ?1-2-3试剂盒的实验方案中,采用快速的步骤从待测样品的总裂解液中回收DNA。
MycoScan试剂盒的主要特征包括:
? 快速、高回收率的样品制备方案
? 灵敏度水平低于10 CFU/mL
? 超过90种的检测
? 单个步骤检测
? 上样即运行,无人值守的自动化
? 无需凝胶电泳
? 实验室设施和空间的*低要求