PCR要想快,方法有很多种,比如买一台快速的PCR仪,再搭配个快速的PCR酶。不过,这快的代价可不小,一般的实验室可能难以承受。有没有一些更靠谱的方法呢,既加快实验进程,又节省经费?于是,研究人员决定从PCR上游的样品制备入手,试图跳过DNA提取和纯化,直接对样品进行PCR扩增。尽管样品中存在一些PCR抑制剂,但如今的PCR酶如此强大,理应能跨过这些障碍。
Clontech公司新近推出的Terra? PCR DirectPolymeraseMix正是这样一种新颖的聚合酶。它能够让您跳过DNA提取和纯化,从血液、动物和植物组织等模板中直接扩增目的片段。这种高度灵敏的DNA聚合酶不仅能帮您节省宝贵的时间和经费,还让您节省宝贵的样品。如果样品本身非常少的话,那可经不起纯化的折腾,直接扩增兴许效果更好。
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Terra PCRDirect中带有单克隆抗体,是一种热启动的PCR。它非常适合扩增短的DNA片段(2kb以下),而不论模板纯度和GC含量。即使GC含量高于70%,它也能成功扩增。说了这么多,也许您还是对它的性能将信将疑,那么下面举几个例子,事实胜于雄辩。点击索取详细技术资料
血液
从EDTA或肝素处理过的小鼠血液中直接扩增靶点。取1μlEDTA或肝素处理过的血液,用Terra PCR Direct扩增cyclin D2基因(Ccnd2,0.5kb)和转铁蛋白受体基因(TfrC,2kb)。PCR反应体系为20μl(血液占5%),反应过程为经典的3步法,30个循环。取3μl产物进行电泳。如图1所示,TerraPCR Direct能够从血液样品中扩增出靶点。
植物
从西红柿和菠菜叶子中直接扩增靶点。取西红柿和菠菜叶子,用打孔机打成0.5mm(第1道)和1.2 mm(第2道)的圆片。用Terra PCR Direct从中扩增细胞色素氧化酶基因(cox1,0.5kb)。将圆片直接置于20μl反应体系中,并进行扩增;取5μl反应产物,跑电泳(图2)。TerraPCR也能够从大的和小的叶子样品中扩增出cox1。
组织
从小鼠尾巴和耳朵组织中直接扩增靶点。取1mm鼠尾活检样本和1.5mm2小鼠耳朵活检样本,用Terra PCRDirect直接扩增Ywhaz1(1kb)。将这些组织直接置于50μl反应体系中,并进行扩增。PCR结束之后,各取4μl与缺乏或包含蛋白酶K的上样缓冲液(分别为第1道和第2道)混合,然后跑电泳。如图3所示,用蛋白酶K处理过的PCR产物如期跑动(第2道),而未经过处理的PCR产物则滞留在点样孔里(第1道)。
看过上面这些例子,现在您终于相信Terra PCRDirect的强大了吧。要不然,您也来试试?如果效果确实不俗的话,想必那些生产核酸纯化试剂盒的厂家得郁闷好一阵子。