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代做实验慢病毒构建技术服务

代做实验慢病毒构建技术服务
一、慢病毒构建
慢病毒载体是指以人类**缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。
二、慢病毒构建原理
慢病毒通过病毒衣壳糖蛋白与细胞膜上的特异受体结合而进入易感靶细胞。一旦与细胞膜上的特异受体结合，慢病毒膜和细胞膜融合后病毒核心释放入细胞浆里。病毒RNA逆转录合成双链线性DNA而转运之细胞核。线性病毒DNA长久性的整合入染色体DNA（宿主基因组）中，形成前病毒，成为长久的遗传成分，在细胞周期中与靶细胞基因一样进行复制，转给子代细胞。前病毒DNA转录成RNA后再转运至胞浆，在胞浆里RNA翻译成病毒蛋白。病毒前结构蛋白和复制酶与病毒RNA组装成新的病毒核心，从包装细胞获得病毒包膜蛋白后以出芽的方式从细胞膜上释放出。病毒前结构蛋白经进一步处理而*终形成成熟的具有感染性的子代病毒颗粒。这些特性是慢病毒成为基因**转运工具的重要原因 。
三、慢病毒构建的步骤
1根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等）获取目的基因；
2. 选择符合实验要求的载体；
3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；
4. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内**）的重组质粒；
5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液；
6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
7. 使用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度。
四、慢病毒构建应用领域
慢病毒载体能够产生表达目的基因的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达目的基因，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物提供了可能性。
慢病毒构建技术服务
我们公司提供慢病毒构建技术服务。如果您有需要可以拨打我们的服务电话或发送邮件至邮箱sales@biovol.net来询价。
 
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