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慢病毒构建技术服务实验外包
慢病毒构建技术服务实验外包
一、慢病毒构建的意义
慢病毒是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性；能整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动物制备；但也有不同于逆转录病毒的组分和特性；比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞，更重要的是还能感染非分裂的细胞。
二、慢病毒构建的原理
慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因**的转移载体。
三、慢病毒构建的步骤
1. 根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等），构建含有外源基因或序列的重组载体；
2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内**）的重组质粒；
3. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞，进行病毒包装并收集上清液；
4. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
5. 用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度；
用高质量的病毒液感染靶细胞，通过定量PCR或者Westenblot检测目的基因表达，也可以进一步进行稳定细胞株的筛选用于长期的功能学研究。
四、慢病毒构建的前景
慢病毒载体具有高效的转染与整合效率，可使外源基因稳定、长期表达，并且经过研究探索，慢病毒载体的生物**性也有了较大改善，转基因试验结果展示了其较为广阔的应用前景。同时其与精子载体法等传统转基因方法的有机结合还将为其推广应用开辟更广阔的途径，尤其是慢病毒载体对精原干细胞转染的研究，将会大大简化转基因技术流程。但是，由于外源基因是随机整合进宿主基因组，有可能产生插入突变，使插入位点基因表达异常或激活下游原癌基因的表达，所以有研究在载体两端插入鸡B球蛋白基因的绝缘子元件以避免载体对原癌基因的激活(Hanawa等，2009)。同时实现慢病毒载体的定点整合不但是研究技术发展的需要，也是转基因生物**性的一个重要方面，随着基因工程技术的飞速发展，慢病毒载体的**性和效率还将进一步提高，并且慢病毒载体转基因技术与其他转基因技术的结合，必将使慢病毒载体技术在转基因动物、医药蛋白、农业产品等方面得到广泛应用。
慢病毒构建技术服务
我们公司提供慢病毒构建技术服务。如果您有需要可以拨打我们的服务电话或发送邮件至邮箱sales@biovol.net来询价。
 
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