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实验外包-RT-PCR/荧光定量PCR结果分析

real time pcr结果分析

Delta Cq ，Cq mean都是在设置的时候必须做的，哪几个孔是重复的，然后机器就会算。是看你的加样误差。

分析的时候只看一个，就是Ct (Cq) 值。先把内参的Cq值的平均数相减（假设你同一个样本一次做了3个孔，就取3个孔的平均数），算出加样的差别。然后再把目标基因的Cq值相减，算出差别，再除以内参的差别，就得到目的基因的差别倍数。

统计学分析要等到你重复至少3次以上完全独立的试验，再做PCR后算出差异倍数，才能做。不然统计的是你的加样误差和机器的分析误差，没有任何意义。

荧光定量PCR结果分析

如果有标准曲线，按照标准曲线计算。

一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：

对照组基因A的CT值为20，内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。

首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。

基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，*后的相对量是2倍。

几点注意：

1。必须确定扩增的特异性

2。只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）

3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。

4。 *好不用Syber Green

实验外包-RT-PCR/荧光定量PCR结果分析

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