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人/小鼠/大鼠白细胞介素6[IL-6]elisa试剂盒说明书

elisa试剂盒-人/小鼠/大鼠白细胞介素6[IL-6]酶联**分析试剂盒使用说明书
人/小鼠/大鼠白细胞介素6[IL-6]elisa试剂盒说明书

本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据
EnzymeLinkedImmunosorbentAssay[ELISA]
人白细胞介素6[IL-6]酶联**分析试剂盒使用说明书
-1-产品编号：50R-E1123H
检测介质：血清-血浆-组织匀浆-细胞培养液
抗体：兔
引言
使用前请您仔细阅读使用说明书。此白介素-6酶联**检测试剂盒应用的是竞争性抑制法
酶联**吸附实验技术，用于定量测定该因子的浓度。试剂盒中使用纯化抗体包被在微孔板
内，使其充分吸附在微孔壁上，制成固相载体。试验过程中标准品、酶标记物和待测样品共
同竞争包被在微孔上的固相抗体的定量结合位点。通过温育反应使其充分结合在微孔壁上，
形成标记复合物。反应过后冲洗掉未结合的部分，再加入底物反应，底物在酶的作用下变为
蓝色，并在酸的作用下转化为*终的黄色。通过使用酶标仪读取吸光度值来绘制出标准曲线，
并在标准曲线上反算出待测样品的浓度。
试剂盒组成
1 包被微孔板：一块。
2 酶标记物：1瓶[6.0mL]，有效期内使用。
3 底物Ⅰ：1瓶[6.0mL]，有效期内使用。
4 底物Ⅱ：1瓶[6.0mL]，有效期内使用。
5 浓缩清洗液[1：10蒸馏水或纯净水稀释]：1瓶[50mL]，有效期内使用。
6 终止液：1瓶[6.0mL]，有效期内使用。
7 标准品：6瓶[1.0mL/瓶]，有效期内使用。
8 检测范围及各标准品浓度：0，10，25，50，100，250pg/mL。
需要但未提供的试剂和器材
◆水温箱或恒温箱 ◆标准规格酶标仪
◆自动洗板机 ◆样本稀释液
◆可调节移液器及配套吸头 ◆蒸馏水和容量瓶
◆无菌试管 ◆震荡器及磁力搅拌器
◆封板膜
注意事项
1 在试验之前要将试剂盒在室温下平衡至少30分钟。
2 使用之前一定要首先确认试剂盒内所有试剂均为正常状态再进行后面的操作。
3 如有问题或不懂之处请务必与供货商进行沟通，否则造成的任何损失均与本司
无关。
4 不要重复使用手中的吸头和试管以及混淆各组分瓶盖，否则会引起交叉污染，
导致试验失败。
本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据
EnzymeLinkedImmunosorbentAssay[ELISA]
人白细胞介素6[IL-6]酶联**分析试剂盒使用说明书
-2-5 该试剂盒内不包含有传染性试剂。
6 不要混用不同指标不同批号的试剂和包被微孔板。
7 试验过程中试剂和待测样品均应充分混匀。
8 包被微孔板应放置2-8℃干燥保存，避免受潮。
9 如有剩余试剂请放置2-8℃冷藏保存。
10 试验过程要严格按照说明书操作，先后顺序不得颠倒。
11 如果样品量较大应注意加样时间，避免加样过慢或间隔时间过长。
12 使用和贮存底物Ⅱ时应注意避光。
13 终止液含有酸性成分具有腐蚀性，勿将其溅落到皮肤或衣服上。如有该情况发生应
立即使用冷水冲洗。
14 试验期间室内温度应始终保持在20-25℃。并保持室内清洁，无粉尘。
15 避免直接接触试剂盒内的液体，一旦接触请尽快用水清洗。
16 在试验过程中不要吸烟、使用化妆品和吃喝。这将对操作者的健康及试验结果造成
影响。
17 不要用嘴吸取试剂瓶内的试剂。
样品的采集和制备
1 收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本储存在
2-8℃备用,如有特殊原因需要周期检测,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件
下保存,并避免反复冻融。样本2-8℃可保存48小时,-20℃条件下可保存1个月，-70
℃条件下可保存6个月。
2 每个样品量收集体积[100ul×需检测的指标，注：样品体积为处理后可进行*终实验
的样品体积]。
3 [血清]操作过程中避免受到刺激，使用非焦化和不含有内**的试管，静脉穿刺收集血
液并迅速离心，分离出血清[2000-3000×g离心20分钟]。如有沉淀形成，应再次离心，
具体离心的时间和转速应根据样品来决定。*终实验的样品应为干净透明状的。
4 [血浆]可使用EDTA[2.0%EDTA.Na2]来抗凝血浆并用于检测，混合10-20分钟后,离心祛
除颗粒[2000-3000×g离心20分钟]。如有沉淀形成，应再次离心，具体离心的时间和
转速应根据样品来决定。*终实验的样品应为干净透明状的。
5 [组织匀浆/细胞培养液（分泌性成分）]使用无菌管收集。离心后取上清液[2000-3000
×g离心20分钟]。如有沉淀形成，应再次离心，具体离心的时间和转速应根据样品来
决定。*终实验的样品应为干净透明状的。
组织匀浆:切割标本，称取质量。加入PBS[7.0-7.4]充分混合，具体的混合比例由操作
者自行决定或可参考相关文献，如有问题也可与供货商咨询沟通后再进行后续操作。混
合后的缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶），充
分混合。
本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据
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人白细胞介素6[IL-6]酶联**分析试剂盒使用说明书
-3-细胞培养液(胞内成分）:应先用PBS[7.0-7.4]稀释细胞悬液,使细胞浓度达到
100万/mL左右,使用细胞裂解液或通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
如有沉淀形成，应再次离心。
6 [体液]离心后祛除颗粒和聚合物[2000-3000×g离心20分钟]。如有沉淀形成，
应再次离心。具体离心的时间和转速应根据样品来决定。*终实验的样品应为干净
透明状的。
7 不要使用高脂血症、溶血、污染或灭活的样品，这样有可能会导致出现错误的结果。
分析过程
实验前处理步骤
1 试验前将试剂和待测样品放置室温下平衡[20-25℃]充分混匀。并确定好本次检测
所��的酶标板孔数目，将所需要的微孔放置到配套板架上。
2 按照要求用蒸馏水或纯净水来稀释浓缩清洗液，充分混匀后备用。
3 将本次实验所需微孔做好相应标记，[如有需要做空白对照孔可预留一孔作为空白
对照孔备用]，*好采用双孔平行加样。
加样以及温育步骤
1 在微孔中将标准品按每孔各[100μl]依次加入一排孔中，并做好相应标记。
2 将处理后的待测样品按每孔各[100μl]依次加入，并做好相应标记。
注标准品及样品不要重复加入同一微孔中。
3 如预留了空白对照孔则除去空白对照孔之外在标准品孔及待测样品孔中分别加入
[50μl]酶标记物，充分混匀。
[重要说明]：加样时尽量将液体加到微孔底部不要触及孔壁，产生大量的气泡。这样会
导致吸光度值的偏差。使用双孔试验将会大大减少这一现象的发生。建议每次检测均应
绘制标准曲线图。
4 将包被微孔板覆膜或加盖放置在37℃孵育反应60分钟后充分弃尽孔内液体并扣干孔内
剩余残液，用预先稀释好的清洗液反复冲洗5次[*后一次冲洗后可使用干净的吸水纸
包裹微孔板倒置于桌面拍打以充分弃尽孔内剩余残液。每次冲洗的间隔时间为3-5秒即
可]。
[重要说明]：洗涤过程非常重要，在冲洗微孔板过程中，务必反复清洗干净，并扣干微
孔中的残余液体，不要使孔内液体溢出污染其他实验孔，否则将导致降低**度，造成
吸光度偏高的假象并有可能使实验*终失败。
5 如预留了空白对照孔则应包括空白对照孔在内，每孔依照次序先加入底物Ⅰ一滴
[约50μl]。再加入底物Ⅱ一滴[约50μl]充分混匀。在室温下避光反应15分钟。
6 反应过后每孔分别加入终止液[50μl]，充分混匀，终止反应。
[重要说明]：加底物Ⅰ/Ⅱ及终止液的过程一定要按照先后顺序进行，不得颠倒，也不可
先将2种底物混合后再加入微孔中，否则将会导致试验失败。
7 在30分钟内使用酶标仪在450nm下读取吸光度值。
本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据
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-4-[重要说明]：试验终止后读取O.D值的间隔时间过长也会导致试验失败。
结果判定
[建议]：如条件允许，为使结果更为准确，建议各检测孔均采用双孔试验。
但这样会导致试验费用的增加。
1 分别计算出各标准品孔及待测样品孔的O.D值。如试验采用双孔则应分别计算出各标准
品孔及待测样品孔的平均O.D值。
2 以标准品浓度由低到高自左至右作为横坐标[X]轴，450nm下读取的各检测孔吸光度值
作为纵坐标[Y]轴。可选用专业的画图软件来进行计算，如需软件可与供货商联系索取。
在Logit-Log直线回归计算模式下[具体方程式为：y=a+b*x]。[或Logistic四参
数回归模式：具体方程式为:y=(A-D)/[1+(x/C)^B]+D]绘制出标准曲线图。
由于各地区的实验室条件环境因素以及操作者水平的差异，所绘制出的标准曲线图也会
有所差别。但是要求尽可能多的点在标准曲线上，其余各点应均匀分布在标准曲线的两
侧，只有这样才能保证用户获得更准确的测试结果。
3 在标准曲线图上或依靠专业的计算软件根据每个待测样品的O.D值在查找出其相对应
的浓度范围。
4 如果样品本身浓度过高不适合本试剂盒提供的检测浓度范围[需要排除是否是由于标准
曲线的倒钩现象造成的样品浓度过高的情况]，则应将样品稀释到该范围之内在进行检
测，可选择PBS缓冲液PH值[7.0-7.4]来进行相应的稀释。但要将检测出的结果在乘以
已稀释的倍数来计算出样本的实际浓度。
标准曲线示例图[LOGIT-LOG模式]
450nm
5 此标准曲线为理想状况下所绘制的,仅为使用者做为参考使用并非本试剂盒的专属
曲线图。
6 每个用户都应根据自身试验室条件建立出适合自己的试验数据及标准曲线。
试剂盒各项性能指标综述
本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据本试剂盒只作为实验室研究使用，不得作为临床诊断的依据
EnzymeLinkedImmunosorbentAssay[ELISA]
人白细胞介素6[IL-6]酶联**分析试剂盒使用说明书
-5-1 *低检测限：1.0pg/mL。
2 板内批间差异：≤6%
3 以标准品浓度及其测定吸光度值拟合出线性回归曲线的相关系数r≥0.98
4 失效期限：6个月[具体日期以试剂盒外盒标签为准]
5 由于现有的科学和条件我们还不能对所有原材料进行更**的鉴定和分析，故本产品可
能会存在一定的技术风险。
6 *终的试验结果与试验者本身操作水平及实验室的条件环境温度等诸多因素密切相关。
为防止试验失败，请用户准备充足的样本备份。
7 在贮存和孵育过程中应避免将试剂暴露在强光下，或在强光下进行试验。所有试剂使用
过后应将瓶盖盖紧，防止蒸发或污染。
8 只有全部使用我们为您提供的试剂并严格遵守本试剂盒的使用说明才能保证用户得到*
佳的检测效果。因为所有的试剂都是有关联的不能混用其他制造商的产品。

上海拜沃生物科技有限公司提供各种种属elisa试剂盒，指标种类齐全，欢迎咨询。
联系方式
电话： 55890177
联系人：李波
在线QQ：516260426

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