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**参选:缺失突变体的构建

赛默飞世尔特约之2010实验室**技术大奖”评选活动开展以来,已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。

目前已经公布了一些项目,这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者,将于2010年7月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名,送出世博会门票或等值的**。

 

 

中科院上海生科院健康所的黄晓菊向大家推荐了一种构建缺失突变体的新方法。

参选项目:缺失突变体的构建

背景:研究蛋白分子某个特定结构域的功能已经是目前分子生物学所必不可少的一部分内容,因此就有必要构建缺失突变体或者点突变!但传统的方法既费时又费力,而且效果不佳!

方法改进:引物设计原则:规定:A/T=2,C/G=4,假设A和T的数目总和为X,C和G的数目总和为Y,在缺失序列的两端设计引物,长度大约为15bp,PF和PR反向互补,保证2X+4Y》45.PCR的延长时间大约为8分钟,反应结束后,PCR回收试剂盒回收,DpnI酶切大约三小时,回收后直接转化,阳性克隆率很高,既方便又快捷!