产品目录

当前位置：首页 >>> 技术文章 >

技术文章

SRB服务|实验技术服务

关键词:SRB服务|实验技术服务
简介：世界**品牌SRB服务|实验技术服务原装**，质量保证,价格优惠。
SRB服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时，我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面，我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
产品品牌：SRB服务|实验技术服务 http://www***********.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
测序实验流程：
1.SRB检测方法的原理
磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用来检测细胞增殖情况。SRB是一种粉红色阴离子染料，易溶于水，在酸性条件下可特异性地与细胞内组成蛋白质的碱性氨基酸结合;在540 nm波长下产生吸收峰，吸光值与细胞量成线性正相关，故可用作细胞数的定量检测。SRB染色后不会像MTT法那样很容易变色，细胞固定染色后在96孔板中可以放置较长时间，因而受测定时间的影响较小。用Tris-base溶液溶解的SRB也可稳定较长时间。因此不同时间点固定的96孔细胞培养板可在同一时间测定，测定的吸光值结果不会受到明显影响。吸光值与SRB浓度作图时，在OD单位1.5-2.0以下为线性，当超出线形范围时，*好稀释后重新读数。虽然SRB法比其他检测方法操作步骤繁琐，但是由于时间可以自己掌握，不受限制，因此适用于高通量筛选。
2.SRB检测的操作步骤
1)细胞固定:药物作用时间终点时，每孔加入50μL4℃预冷的TCA溶液(30%，w/v)固定细胞，TCA溶液的终浓度为10%。静置5 min移入4℃冰箱中固定1 h，取出用去离子水冲洗5遍，室温晾干。
2)染色:待96孔板室温下晾干后，每孔加入0.4%(w/v)的SRB染液(1%的乙酸配制)70μL，染色30 min后倒掉染液，用1%(v/v)乙酸冲洗4次，去除未结合的染料，室温晾干。
3)检测:用100μL非缓冲Tris-base碱液(10mM，pH=10.5)溶解与细胞蛋白结合的染料，水平摇床上振荡20min，采用酶标仪540nm处测定光吸收值。操作中，应注意洗除染料时操作需迅速，避免用移液器吸取液体，防止动作过慢造成与细胞蛋白结合的染料解吸附。
3.SRB检测的计算公式
根据美国国立癌症研究所(National Cancer Institute，NCI)关于SRB检测的介绍，细胞增殖百分率的计算存在以下两种情况:1)Tx-T0>0，PG=100×(Tx-T0)/(C-T0)
2)Tx-T0<0，PG=100×(Tx-T0)/T0
其中，
T0:药物作用前的细胞经过固定、染色后测得平均吸光值;
C:培养基中加有等体积的DMSO，没有药物作用的阴性对照的平均吸光值(阴性对照);
Tx:药物作用终点时细胞经过固定、染色后测得平均吸光值。
PG即Percentage Growth，是指药物作用的样品孔与阴性对照孔中细胞增殖量的百分率。
1，根据水样中 SRB 的估计浓度，可以选择一组合适数目的细菌瓶。首先将培养瓶排成一组，并依次编上序号。
2，将细菌瓶的瓶塞保护膜揭去，并用 70%的乙醇溶液消毒。
3，按照准备工作的第 3 条操作后，用无菌注射器取 1ml 水样，注入到一号瓶内，充分震荡。
4，用另一支无菌注射器从一号瓶内取 1ml 水样，注入到二号瓶内，充分震荡。
5，再更换一支无菌注射器，从二号瓶内取 1ml 水样，注入到三号瓶内，充分震荡。
6，依次类推，一直稀释到*后一瓶为止。根据细菌含量确定稀释瓶数，一般稀释到 7 号瓶。
7，把上述测试瓶放入到恒温培养箱中，培养温度控制在现场水温正负 1℃范围内，两周后读数。

上一篇：Transwell实验服务|实验技术服务
下一篇：Transwell实验|实验技术服务

若网站内容侵犯到您的权益，请通过网站上的联系方式及时联系我们修改或删除