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Transwell实验服务|实验技术服务

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测序实验流程：
细胞种在上室内，因聚碳酸酯膜有通透性，故可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
根据transwell的特点（孔径，膜），可进行如下方面研究：
1.共培养孔径<3.0um
研究下室细胞B代谢物（分泌物）对上室细胞A的影响。
2.细胞趋化孔径可选择5.0、8.0、12.0µm
研究进入下室的细胞量，反映下室成分对上室细胞的趋化能力
3.细胞迁移孔径常选择8.0、12.0µm
研究进入下室的细胞量，反应上室细胞的迁移能力
4.细胞侵袭孔径常选择8.0、12.0µm，膜上室侧铺有基质胶，
研究进入下室的细胞量，反映上室细胞的侵袭能力
一、肿瘤细胞侵袭实验（transwell）
原理：
模仿体内细胞外基质，细胞只有分泌基质金属蛋白酶（MMPs），降解基质胶才可进入下室。
步骤
1. Transwell小室准备
1）无基质胶Transwell小室制备
A. 包被基底膜：
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀释，无血清培养基作为稀释液
B. 取适量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul)，4℃操作。
C. 37℃培养箱中，孵育4-5h（>5h）；出现“白色层”时，说明已经变为固态。
2）有基质胶Transwell小室制备
A. 小室放入培养板中，上室加入300µl预温的无血清培养基
B. 室温下静置15－30min，使基质胶再水化
C. 再吸去剩余培养液。
2．细胞悬液准备
1）消化、收集细胞；
2）PBS洗1－2次
3）用含BSA的无血清培养基重悬（细胞密度约在1－10×105/ml）。
3. 细胞接种
1）取适量细胞悬液加入Transwell小室（按transwell说明）。24孔板小室一般200µl。
2）24孔板下室一般加入500µl含FBS或趋化因子的培养基。注意避免气泡产生（下层培养液和小室间）
3）培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。
4. 结果统计

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