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细胞毒实验(MTT法)|实验技术服务

关键词:细胞毒实验(MTT法)|实验技术服务
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细胞毒实验(MTT法)|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程：
（Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）以MTT为指示剂，在经典操作方法的基础上，采用了独特的甲簪溶解液，可以直接溶解甲簪，而无需离心去除原有的培养液，故可避免因甲簪部分被吸除而引起的操作误差，具有本底低，灵敏度高，线性范围宽，操作简便等特点。
保存条件
MTT溶液-20℃保存，一年有效；Formazan溶解液室温或-20℃保存。
使用说明
1. 细胞的增殖和细胞毒实验，一般可在96孔细胞培养板中进行。
2. 每孔加入100微升细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。增殖实验每孔通常加入103个以上数量的细胞；细胞毒性实验每孔至少加入5x103个或以上数量的细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素确定）。
3. 接种的细胞按照实验需要，送入细胞培养箱进行培养。增殖实验通常要给予0-10微升特定的药物或生长因子进行刺激。细胞毒实验通常要给予0-10微升抑制因子或细胞药物；
4．培养结束后，每孔加入20微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育3－6小时；
5．孵育结束后，每孔加入100微升Formanzan溶解液，在37℃细胞培养箱内再继续孵育，直至在镜下观察formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会略长。
6. 在570nm测定吸光度。如无570nm滤光片， 560-600nm范围的滤光片均可使用。

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