**内膜基质细胞原代分离研讨

2024年5月29日，周三，公司组织，由实验室主管刘博主导，实验室全体成员参与，对**内膜基质细胞原代分离的相关知识点，进行了培训与交流。本次会议，主要针对**内膜基质细胞原代分离，就以下内容展开了交流：

培训内容包含：分离、培养、鉴定、冻存及复苏几个方面。其中分离步骤较为关键。以下是分离步骤：

（1）**内膜置于含无菌DHanks液的100ml三角烧瓶,立即送实验室。

（2）洗涤2次,用眼科剪将组织剪成1~2mm³的碎块,400xg离心10min。

（3）加入0.25%胰酶(Trypsin,Sigma),37℃消化30分钟,轻轻吹打。

（4）细胞悬液依次通过孔径为105及88um尼龙网,基质细胞通过网眼,而上皮细胞留在网上。

（5）取基质细胞洗涤2次（DMEM/F(1:1)(GIBCO)）,将细胞悬浮在2ml的培养液中小心铺在含有10ml培养液的离心管液面上,密封管口,在37℃(垂直)、置5%C02,培养箱中30分钟,沉淀后吸出上层8ml,缓慢移至另一离心管中,400xg离心10分钟,收集细胞,细胞再悬浮在2ml培养液中,重复上述步骤,然后,将细胞（5）通过37um的尼龙网，用0.04%的台盼蓝计算活细胞数。

（6）将细胞接种到塑料瓶或培养皿中(NUNC),37℃、5%C0培养30~40分钟,基质细胞迅速贴壁,而上皮细胞则悬浮在培养液中,重复一次,即可得到高纯度的上皮细胞,细胞经离心、洗涤，用0.04%台盼蓝计算活细胞数。

本次会议，从分离、培养、鉴定、冻存及复苏几个方面，提升公司对**内膜基质细胞原代分离的重要知识点的认知，掌握课题研究中所涉及到实验方法。