透射电镜制样及取材方法

透射电镜制样流程：

1.取样

因戊二醛和锇酸的固定深度有限，样品越小越好，尽量取1mm*1mm*1mm。

2.先固定戊二醛在3%-6%。

参考：25%戊二醛（买Sigma公司的G5885或者更高浓度的戊二醛）和0.2M PBS

配置为戊二醛5%和0.1M PBS缓冲液的混合工作液；时间：常温4小时后，4度冰箱过

夜。

3. 清洗

PBS缓冲液冲洗。要洗干净，否则戊二醛和锇酸会产生沉淀。参考：每15-30

分钟更换一次，共4次。

4.后固定

参考:锇酸2%，固定4小时。剧毒，在通风橱操作。

5.清洗

PBS缓冲液冲洗。

6.梯度脱水

参考：乙醇梯度脱水:30-50-70-90-95-100-，每次10-15分钟，无水乙醇中加分子筛

或者无水硫酸铜，提前一周配置好备用。

7.渗透

参考：spurr树脂。包埋板即可。

8.包埋聚合

参考：70度，24小时。

10.超薄切片

11.染色（1）醋酸双氧铀封口膜上染色，染色时间参考：10分钟（铀染）;（2）水清洗;

（3）柠檬酸铅因其极易和空气产生铅沉淀，染色时旁边放NaOH颗粒，注意避光。

组织和器官取材方法： 事先准备好所需的器械和固定液，并把它放4℃冰箱内预冷备用。如为穿刺物（肾组织、肝组织、脾组织等）、剪取物（胃镜剪取物、支气管镜剪取物、肠镜剪取物等）、手术切除物（肿瘤组织以及实验动物脏器等），均应在离体后迅速用生理盐水冲洗后或直接投入预冷的2.5%戊二醛固定液（保质期为1个月）内，并把它放4℃冰箱内保存，一般要求在两分钟内完成。