一、基本原理及实验目的
质粒提取实验的目的是获得较纯净的DNA质粒。常用的方法有碱裂解法和煮沸法，其中碱裂解法是常用的小量制备质粒DNA的方法。
二、主要仪器及试剂
高速离心机，质粒提取试剂盒（Bioflux）。
三、质粒提取操作步骤（以Bioflux公司的试剂盒为例）
1、将1ml过夜培养的菌液倒入离心管中，室温12000r/min，离心1min。
2、弃培养液，使**沉淀尽可能干燥。
3、加入预冷的I液250ul,涡旋振荡使细胞重新悬浮。
4、往悬浮液中加入II液250ul,盖紧管口，温和上下颠倒4-6次，获得澄清的裂解液。
5、往上述混合液中加入III液350ul，盖紧管口，温和上下颠倒4-6次，直至形成白色絮状沉淀。室温13000r/min,离心15-20min。
6、小心吸取上清液，没有沉淀吸出，转移至收集柱中。室温12000r/min，离心1min。
7、弃去离心甩出液，加入700ulDNA洗涤缓冲液洗涤柱子，室温12000r/min，离心1min。
8、重复操作步骤7，弃去甩出液。
9、空离心，室温12000r/min，离心1min。
10、把柱子置于一个干净的1.5ml离心管中，加入TE缓冲液50-100ul到柱子上，静置2min。
11、室温12000r/min，离心1min，以洗脱出DNA。可选重复操作进行**次洗脱。
12、提取的质粒可于4℃短期保存，并可于-70℃或-20℃长期保存。
四、结果判读
质粒本质是双链DNA，其质量和纯度可以用紫外分光光度计定量，高质量的质粒定量结果OD260/OD280在1.8左右，越接近1.8越好，若比值明显低于1.8可能存在蛋白或提取试剂污染，明显高于1.8可能存在RNA污染，OD260值在0.1-1.0之间，OD260/OD280的读数才可信。质粒浓度=OD260值×50×稀释倍数/1000。
五、注意事项
1、过夜培养后，收集的**量要足够，以提取质粒的浓度。
2、加入I液后，涡旋振荡要充分，以**裂解。
3、吸取上清液没有沉淀，宁可少吸取一些液体。
4、空离心十分必要不能忽略。
服务电话021-55130726，如想了解质粒提取的更多内容，欢迎来电咨询，我们将热情为您服务。
