实验动物 :SPF级Balb/c小鼠,健康,雌性未孕,4~6W,体重为18g~20g
实验分组 :正常对照组、模型组、阳**组、受试药组三个剂量组,每组15只动物。
实验周期 :12W
一、建模方法
1. 小鼠3%****钠40mg/kg腹腔麻醉后仰卧,腹部脱毛。
2. 在无菌条件下于腹股沟水平沿腹中线剪开皮肤及肌层,暴露腹腔。
3. 分离**并摘除卵巢,清理伤口后分两层缝合皮肤及基层,待小鼠清醒后,将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养,定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录。
4. 术后3天,每只小鼠每天注射4万单位青霉素,防止感染。
5. 对照组仅摘除卵巢周围约1 g脂肪,而保留卵巢,其余处理相同。
6. 12W取材,X线测量各组小鼠骨密度(bone mineraldensity ,BMD),再腹腔注射麻醉,摘眼球取血,室温静止2h,4℃离心机3000r/min离心10min,分离出上层血清,置-80℃冰箱保存备用。取小鼠胫骨标本用于病理学检测。
二、模型的评价
1.卵巢去势后小鼠体重、雌二醇及骨密度变化
去势组大鼠体重增长迅速,活动能力下降,毛色缺乏光泽而略灰暗,而对照组小鼠体重增加缓慢,毛色光亮,活动正常。去势组雌二醇水平及股骨 BMD 显著下降。
2.骨形态学染色
取各组小鼠胫骨标本,置入 10%中性甲醛缓冲固定液中(pH=7.2-7.4,4°C)固定 24-48h,再经 10%EDTA-2 Na 缓冲液(pH=7.4,4°C)脱钙,隔5-7d 更换脱钙液;脱钙后,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,纵向石蜡包埋,5um 连续切片,常规 HE 染色。
对照胫骨骨小梁密集,相互交织成网状;模型组骨小梁数目明显减少,骨小梁变薄,呈断裂状。
3.细胞因子的检测
有研究发现,雌**的缺乏将导致机体自发的启动应激反应。去势后血清中IL-6 、IL-8 、IL-1β、TNF-α 的表达量增加,可以用ELISA 法检测。
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