PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain) 又称过碘酸雪夫染色、糖原染色,在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基,再与Schiff试剂的无色品红结合而呈紫红色。
随着医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质,心肌病变及其他心血管疾病的诊断,糖原累积病诊断和研究,糖尿病的诊断和研究,用于某些肿瘤的诊断等。
固定液
Carnoy固定液:
纯酒精60 ml 冰醋酸10ml氯仿 30ml,也可以选用75%酒精.
液配制
1) 过碘酸酒清夜配法:
过碘酸(HIO .2H O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml;
保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.
2)Schiff氏液:
0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.
3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml 1N
HCI 0.5ml 纯酒精 23ml
4) 亚硫酸水 1%偏重亚硫酸钠10ml 1N
HCI 10ml 蒸馏水 180ml的树胶溶解。
5)哈瑞或迈耶苏木精
染色步骤
1. 石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗)
2. 蒸馏水洗
3. 过碘酸酒清夜10min
4. 自来水冲洗10min
5. Schiff氏液10min
6. 流水冲洗5min
7.用哈瑞苏木精或迈耶苏木精染核3min(细胞核染色过深可用盐酸酒精分化)
8. 流水冲洗5min
9. 常规脱水、透明、封固
结果
PAS阳性为红色,细胞核蓝色。
注意事项
1、高碘酸溶液为透明溶液,长时间染色如果没有带入杂质的话此溶液一直是透明的,所以无法从常规的颜色辨别高碘酸的好坏,只有定期更换,根据标本的多少1~2月更换一次。
2、雪夫试剂要放入冰箱保存,临用前半小时取出恢复至室温,用后又倒回原瓶内放冰箱保存;雪夫试剂出现淡红色就不能继续使用了。
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