免疫沉淀实验

实验流程：

（1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C，zui大转速离心30 min后取上清；

（2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4℃缓慢摇晃孵育过夜；

（3）取10μl protein A 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3 次，每次3,000 rpm离心3min；

（4）将预处理过的10μl protein A 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4℃缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与protein A琼脂糖珠偶连；

（5）免疫沉淀反应后，在4℃以3,000 rpm 离心3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3－4次；zui后加入15μl的2×SDS 上样缓冲液，沸水煮5min；

（6）SDS-PAGE, Western blotting或质谱仪分析,通过免疫共沉淀确定结合蛋白

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