β-半乳糖苷酶染色

β-半乳糖苷酶染色

细胞衰老是细胞在正常环境条件下发生的功能减退、逐渐趋向死亡的现象。衰老的细胞虽然生长发生不可逆性停滞，不能进入S期，但仍具有代谢功能，而且比年轻细胞的抗凋亡能力强，可以继续生存。其特征是细胞体积变大，呈扁平状；细胞核变大，核膜内陷，染色质聚集、固缩、裂解；胞质内颗粒增加，有空泡形成；线粒体的数目及形状发生改变；膜流动性降低；溶酶体内容物增多，导致溶酶体酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老细胞所具有的上述特征成为各种细胞衰老检测手段的依据。

(1)细胞接种前在6孔培养板中预先放置灭jun的细胞片a，每孔加入1x105个细胞，37℃ 5% CO2

条件下培养过夜，使细胞在细胞片上生长。

(2)在超净工作台中吸弃6孔培养板中的培养液a，加入x1PBS，洗涤细胞1次，随后加入2%甲

醛/0.2%戊二醛固定液a，室温条件下固定3~5分钟。

(3)吸弃2%甲醛/0.2%戊二醛固定液，加入x1PBS，洗涤细胞3次，每次3分钟。

(4)吸弃x1PBS，加X-Gal溶液以浸没细胞片为宜，37℃孵育4~8小时或过夜，用保鲜膜包被6

孔培养板以防染液蒸发。

(5)取出细胞爬片，去离子水。冲洗2次，再次用固定液固定4分钟，流水轻轻冲洗。

(6)将细胞爬片按此顺序脱水、透明:95%酒精I(2分钟)→95%酒精Ⅱ°(2分钟)→100%酒精

| (2分钟)→100%酒精I(5分钟)→二甲苯|(2分钟)→二甲苯Ⅱª(2分钟)。

(7)中性树胶封片。

(8)在普通光学显微镜下观察衰老细胞形态。

每张片子镜下计数400个细胞，确定X-Gal染色阳性细胞(衰老细胞)在细胞群体中的所占的百分

比即衰老细胞率(蓝染细胞数/总计细胞数x100%).

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