免疫共沉淀实验

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种研究蛋白质相互作用的常用实验技术。蛋白间相互作用是细胞各种基本功能的主要完成者，参与几乎所有的重要生命活动。因此，蛋白-蛋白相互作用研究以及建立相互作用的关系网络图，具有十分重要的意义，也是目前蛋白质研究领域的热点。

一、基本原理

利用抗体特异性地结合目标蛋白，在细胞裂解液中与目标蛋白形成免疫复合物，然后通过Protein A/G 等介质将免疫复合物沉淀下来，进而分析与目标蛋白相互作用的其他蛋白质。

二、免疫共沉淀实验优势：

1. 取材可以选择该目的蛋白所在物种、特定组织、细胞，因此CoIP能够反应该蛋白在天然组织细胞状态下存在的互作关系蛋白；
2. 找出整个复合体中直接/间接互作的多个蛋白，研究复合体组成；
3. 通过与质谱鉴定连用可以初筛到一系列未知蛋白，再通过其他技术进一步验证。

三、主要步骤

1. 细胞裂解：收集细胞，用适当的裂解液裂解细胞，释放出蛋白质。

2. 抗体孵育：加入特异性抗体，与目标蛋白结合形成免疫复合物。

3. 加入 Protein A/G 介质：Protein A/G 可以结合抗体，从而将免疫复合物沉淀下来。

4. 洗涤：去除非特异性结合的蛋白质，多次洗涤沉淀复合物。

5. 洗脱：用适当的洗脱液将免疫复合物从 Protein A/G 介质上洗脱下来。

6. 分析：可以通过 Western Blot、质谱等方法分析免疫复合物中的蛋白质，确定与目标蛋白相互作用的蛋白。

四、实验注意事项

1. 抗体选择：选择特异性高、亲和力强的抗体至关重要。

2. 裂解液：裂解液的成分要合适，既要能充分裂解细胞释放蛋白质，又不能破坏蛋白质之间的相互作用。

3. 对照设置：设置正确的对照实验，如使用正常 IgG 作为阴性对照，以排除非特异性结合。

4. 洗涤条件：洗涤要充分，但不能过于剧烈以免破坏免疫复合物。

5. 避免蛋白降解：整个实验过程中要尽量避免蛋白质降解，可以加入蛋白酶抑制剂。

五、达为科实验服务

分子实验平台：高效运作了qRT-PCR、Western blot、双向电泳技术、分子克隆与质粒构建、流式细胞仪检测、免疫共沉淀、染色质免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝胶电泳迁移实验、酶联免疫吸附测定、外泌体抽提及鉴定等实验。

基因组学平台：可以完成甲基化检测、基因芯片分析、高通量测序等实验。

蛋白组学平台：能实现LC-MS、ITRAQ、蛋白质修饰分析等重点实验项目。

病理学平台：涉及免疫荧光染色、免疫组织化学染色、HE染色、特殊染色等实验。

生物信息学分析：文本挖掘，芯片表达谱分析，序列分析，转录因子靶点预测，高通量测序数据分析等项目

临床前CRO服务：主要提供呼吸系统、神经系统、免疫系统性疾病的药效学评价服务，包括靶点验证、体内外模型的构建、药物筛选、药物分析、药效性评价、药代动力学和药理学研究以及院内制剂研发等。

项目转化服务：助力客户进行方案设计、联合课题申报、药物项目引进和孵化，解决客户对实验技术平台、专业人才、zhuanli申请和融资的需求；

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