基于金磁—量子点双标记的牛乳酪蛋白快速**检测新方法研究
汪艳姣
上海师范大学
摘要：近年来,随着人们的生活水平日渐提高以及牛乳制品的广泛普及,牛乳过敏问题得到了人们的广泛关注。本论文将量子点良好的光学特性与金磁微粒可被快速富集的优势相结合,建立了基于金磁-量子点双标记的牛乳酪蛋白快速**检测的新方法,主要开展了以下几个方面的工作:一、以巯基乙酸为稳定剂,采用水相合成法成功制备了表面带有羧基的绿、黄、橙、红四种荧光颜色的Cd Te量子点;采用一锅法合成了氨基化的磁性复合微粒(Fe3O4-PEI),通过两次包金过程,得到了多层复合型金磁纳米微粒(Fe3O4-PEI-Au1-PEI-Au2)。并对其相关性能进行了表征与测试,实验结果表明,所制备的量子点具有良好的光学性能,其激发光谱宽且连续,发射光谱窄而对称,荧光强度较高、且不易聚沉;所制备的金磁微粒粒径均一,具有良好的分散性和晶体结构且磁性好,能很好的用于磁性分离和生物修饰,为本论文后续的拓展与应用研究提供了保证。二、以橙色CdTe量子点为代表,小鼠IgG作为模式抗原,兔抗鼠IgG和羊抗鼠Ig G均作为模式抗体,可与小鼠Ig G上的不同位点相结合。其中,羊抗鼠Ig G偶联Cd Te量子点得到荧光探针,兔抗鼠Ig G偶联金磁微粒得到金磁探针,在此基础上构建了金磁-量子点双标记快速**检测体并优化了两探针的合成条件。金磁探针与小鼠Ig G相结合,并结合量子点荧光探针上的兔抗鼠Ig G,*终形成“三明治”式的复合物。根据复合物上荧光强度的大小,从而实现对小鼠Ig G的定量检测。实验结果表明,在优化的探针条件下,小鼠Ig G的量与荧光检测信号呈正相关。由此说明基于金磁-量子点双标记**检测体系成立,有望用于实际样品检测中。三、在之前研究的基础上,采用两种可与牛乳酪蛋白不同作用位点结合的抗体,将其中单克隆抗体修饰到金磁微粒上作为捕获探针,多克隆抗体修饰到量子点上作为荧光检测探针,建立了一种基于“三明治夹心式”的牛乳酪蛋白**检测新方法,并用于牛乳过敏原的实际检测。结果得到酪蛋白含量在6.25~100ng/m L范围内与荧光强度具有良好的线性关系,*低检出限为1.8 ng/m L。通过和ELISA方法的对比以及加标回收实验证明本检测方法准确性好,稳定性强,重复性佳,可以用于实际样品的检测。该金磁-量子点双标记**检测体系可以为牛乳过敏原的检测提供理论和现实依据。
关键词：牛乳; 过敏原; 酪蛋白; 金磁纳米微粒; 量子点; **检测; 双标记;
导师：魏新林; 王元凤;
分类号：TS252.7
