细胞复苏的原则:
在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。
操作流程:
1. 细胞实验室进行常规消du,紫外照射40min以上。
2. 培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱370C预热20min,备用。
3. 二甲基亚砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min,备用。
4. 从液氮保存罐中取出冻存管,立即放入400C水浴中,快速摇晃,直至冻存液*融化。
5. 将细胞悬液移入15ml离心管,缓慢加入4ml培养液,离心(1000r/min,5min)。
6. 用培养液悬液混悬沉淀细胞,调整细胞浓度,方培养箱中培养。
7. 记录复苏日期。