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细胞复苏原则及操作流程

细胞复苏的原则:

在实际操作中,冻存细胞要进行复苏,再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化,以避免慢速融化水分渗入细胞内,再次形成胞内结晶损伤细胞。


操作流程:

1.  细胞实验室进行常规消du,紫外照射40min以上。

2.  培养液(DMEM)、0.25%胰蛋白酶(Trypsin)恒温水浴箱370C预热20min,备用。

3.  二甲基亚砜(DMSO)在40C冰箱中冷藏30min,备用。

4.  从液氮保存罐中取出冻存管,立即放入400C水浴中,快速摇晃,直至冻存液*融化。

5.  将细胞悬液移入15ml离心管,缓慢加入4ml培养液,离心(1000r/min,5min)。

6.  用培养液悬液混悬沉淀细胞,调整细胞浓度,方培养箱中培养。

7.  记录复苏日期。