酶标记的抗原或抗体称为结合物（conjugate）。抗原由于化学结构不同，可用不同的方法与酶结合。如为蛋白质抗原，则可参考抗体酶标记的方法。制备抗体酶结合物的方法通常有以下几种。
1、戊二醛交联法：戊二醛是一种双功能团试剂，酶和抗体中的氨基可通过该试剂进行偶联。戊二醛交联可用一步法（如连接 AP），也可用二步法（如连接 HRP）。偶联方法为：2～5 mg 纯抗体与 5 mg AP 混合于1ml 0.1mol/L pH6.8 的磷酸盐缓冲液中，并用此磷酸盐缓冲液对该酶和抗体混合液于4℃ 下透析平衡。磁力搅拌下，向酶和抗体溶液中缓慢加入1％戊二醛0.05 ml，在室温下放置2小时。在 4℃下使用 50mM pH8.0 Tris缓冲液对偶联后的酶和抗体溶液透析平衡，即得酶标抗体。
2、过碘酸盐氧化法本法只用于HRP的交联。该酶含 18％ 碳水化合物，过碘酸盐将其分子表面的多糖氧化为醛基。用硼氢化钠（NaBH4）中和多余的过碘酸。酶上的醛根很活泼，可与蛋白质结合，形成按摩尔比例结合的酶标结合物。有人认为此法为辣根过氧化物酶交联有效的方法。但也有只认为由于所用试剂较为剧烈，各批实验结果不易重复。