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PCR反应出现非特异性扩增分析

出现非特异性扩增:PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。


(1)  引物与靶序列不完全互补或引物聚合形成二聚体。


(2) Mg2+离子浓度过高。


(3) 退火温度过低。

(4) PCR循环次数 过多有关。


(5) 酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。


其对策有:必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量,适当增加模板量,减少循环次 数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性,65℃左右退火与延伸)。