原代细胞培养就像是从种子开始种一棵树,要把动物组织从机体里取出来,经过各种处理,让细胞在培养基里生存、生长和繁殖。
准备材料和仪器:
仪器:培养箱(37℃)、培养瓶、吸管、离心机……
材料:动物组织块
试剂:1640培养基(含20%小牛血清)、0.25%胰酶、Hank's液等。
处理组织:
把组织块放在烧杯里,用Hank's液洗2-3次,去掉血污。如果怀疑污染,就用青链霉素泡30-60分钟。
剪切和消化:
用眼科剪把组织切成2-3毫米的小块,然后加入胰蛋白酶液,放到37℃的温箱里消化。每隔20分钟摇一摇,直到细胞分散成团或单个细胞。✂️
分离和计数:
用筛子过滤掉没消化开的组织块,离心后吸出上清,加入培养液。用计数板数一数细胞密度,调整好后分装到培养瓶里。
培养:
把培养瓶放到36.5℃的温箱里,静待细胞生长。如果用CO₂温箱,记得用纱布或螺旋帽堵住瓶口。