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荧光定量PCR扩增曲线介绍
扩增曲线
是描述PCR动态进程的曲线,以循环数为横坐标,以反应过程中实时荧光信号强度为纵坐标。
理论上PCR过程中反应产物是以指数增长的,但随着PCR循环数的增加,DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反应副产物阻碍反应等原因,致使PCR的扩增效率降低,产物**的速度逐渐减缓,因此扩增曲线是一条“S形”曲线。
扩增曲线可以分成四个时期:
基线期,指数期,线性期,平台期。
基线期:
扩增曲线的水平部分,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物**量的变化。
指数期:
PCR指数扩增期,扩增曲线起峰,每个循环的产物量与初始模板量符合指数关系,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系。
线性期:
PCR反应后期,由于PCR反应体系各成分的消耗、产物抑制等因素的影响,反应效率降低,产物量与初始模板量不再符合指数关系。
平台期:
PCR反应停止,PCR产物不再随循环数增加而增加。由于影响PCR扩增的因素错综复杂,每个反应进入平台期的时间和平台期的高低都各不相同。
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