RL95-2 细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

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细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

含SET域4(setd4)ELISA试剂盒硫代乙酸铵 试剂级,70%溶液二乙烯苯 55%木犀草素

含patatin样磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA试剂盒硫代乙酸 CP,85.0%乙基苯 >99.5%(GC)木犀草素（标准品）

过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二异辛酯 CP，98%乙酸甲酯  ≥99%(GC)熊果酸

过氧化脂质(LPO)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二辛酯 GR甘氨酸 AR,99.5-100.5%熊果酸；乌苏酸(标准品)

过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二异辛酯 AR,99%三氯蔗糖  98%香叶木素

过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二异辛酯 分析标准品, ≥99.5% (GC)烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作为稳定剂香叶木素（标准品）

过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARGC1)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二异辛酯  标准溶液1000μg/ml，溶剂：甲烯酸叔丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)金雀花碱,野靛碱

过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二异辛酯 标准溶液500μg/ml，溶剂：甲1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯 99%金雀花碱,野靛碱（标准品）

过敏素/补体片断4(C4a)ELISA试剂盒邻苯二甲酸二辛酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)N-(3-二甲氨基基)甲基烯酰 99%厄贝沙坦

果糖二磷酸缩酶A(ALDOA)ELISA试剂盒俾斯麦棕R Biological stain1,5-二氮杂双环[4.3.0]-5-壬烯 98%5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-胸苷-3'-O-丁二酸

果糖(FRA)ELISA试剂盒俾斯麦棕Y Biological stain烯酸异丁酯 99%水杨苷

果糖1,6二磷酸缩酶(FDA)ELISA试剂盒3-氯-4-氟苯 99%鸡蛋白蛋白 98%水杨苷(标准品)

广谱角蛋白(P-CK)ELISA试剂盒2,6-二氟苯 97%1,1-环己基二乙酸酐 98%厚朴酚

胱抑素SN(CST1)ELISA试剂盒2,6-二氟苯甲酸 分析标准品乙酰酮钡 Ba ≥30.0 %厚朴酚(标准品)

胱抑素F(CST7)ELISA试剂盒2,6-二氟苯甲酸 98%硫柳汞钠 AR,98%埃索美拉唑镁(三水)

胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)ELISA试剂盒顺式-2,6-二甲基哌 98%钠 AR芦丁/芸香叶苷
RL95-2 细胞凝结芽孢杆菌

种属: Bacillus│coagulans

分离基物: 乳制品

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: 产糖苷水解酶抑制物、产L(+)乳酸

培养基: 348

嗜渗正青霉

种属: Eupenicillium│osmophilum

分离基物: 土壤

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: yes

培养基: CM0072

生长条件: 25℃
培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

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