sh-sy5y转染野生型细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

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细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒刀豆凝集素A 2 μg/ml1,2,4-三氯苯 光谱纯琼脂粉

高糖基化绒毛膜促性腺(hCG)ELISA试剂盒 USP级氢氧化钠 GR,97%,片状三氟胸苷;三氟尿苷(TFT)

高速泳动蛋白17(HMG-17)ELISA试剂盒3-[(3-胆固氨基)二甲基氨基]-2-羟基-1-磺酸 99%6-氨基荧光素  >97%(HPLC)四水合辅羧酶;四水合硫焦磷酸酯

高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒橘霉素 98%5(6)-氨基荧光素  荧光级,>94%(HPLC)甲磺酸加替沙星

高迁移率族蛋白1(HMGB1)ELISA试剂盒硫酸葡聚糖 M.W 5000005-氨基荧光素 96%盐酸哌罗匹隆

高敏状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒葡聚糖10 分子量100006-羧基荧光素 95%替拉扎明

高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒毛地黃皂苷 50%5-羧基荧光素 95%糊精;白糊精

高密度脂蛋白胆固(HDL-C)ELISA试剂盒4,’6-二脒基-2-苯基吲哚 98%5-羧基四甲基罗丹明 95%盐酸苄达明

高密度脂蛋白3(HDL3)ELISA试剂盒十二烷基吡喃葡萄糖苷 99%5(6)-羧基荧光素二乙酸酯 for fluorescence, ≥90.0% (HPLC)葡聚糖凝胶G-50;交联葡聚糖G-50(中颗粒)

高密度脂蛋白2(HDL2)ELISA试剂盒硫酸葡聚糖钠盐 分子量500000，无DNA酶/RND酶/蛋白酶6-羧基荧光素二乙酸酯  95%葡聚糖凝胶G-50;交联葡聚糖G-50(粗颗粒)

高密度脂蛋白1(HDL1)ELISA试剂盒三磷酸脱氧鸟苷钠盐 98%5-羧基荧光素琥珀酰亚酯 90%L-(+)-扁桃酸;S-扁桃酸

高密度脂蛋白(HDL)ELISA试剂盒三磷酸脱氧鸟苷溶液 dGTP,100 mM 溶液, pH 7.05(6)-羧基荧光素 95%D-(-)-扁桃酸;R-扁桃酸

高灵敏度促甲状腺(U-TSH)ELISA试剂盒N-癸酰基-N-甲基葡糖 生化试剂级，BC5(6)-羧基荧光素琥珀酰亚酯 96%1-氨基海因盐酸盐;AHD，1-氨基乙内酰脲盐酸盐

高分子量脂联素(HMW Adiponectin)ELISA试剂盒N-癸酰基-N-甲基葡糖 高纯级6-羧基荧光素琥珀酰亚酯 90%1-氨基海因盐酸盐（标准品）

高分子量角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒糖原 ≥90% 5- 羧基荧光素二乙酸酯 95%人促肾上腺皮质(1-24),替可克肽

高尔基体抗体(AGAA)ELISA试剂盒乙酰 98%异硫酸荧光素(异构体I) 90%缓激肽
sh-sy5y转染野生型细胞微黄棒杆菌

种属: Corynebacterium│flavescens

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: 模式菌株

培养基: 0002

生长条件: 30℃

共头霉

种属: Syncephalastrum│sp.

分离基物: 土壤

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: no

培养基: 0014

生长条件: 25℃
培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

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