Snu-182细胞

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实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。 

肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)ELISA试剂盒乙酸钠 98%穗花牡荆甙 分析标准品，≥98% 酵母浸粉；酵母粉

肝脏甘油三脂脂肪酶(HTGL)ELISA试剂盒硫代甜菜碱 12 98%桃叶珊瑚苷 分析标准品，≥98%核糖核酸酶 A 溶液

肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)ELISA试剂盒十二烷基硫酸钠 97%，电泳白果内酯 分析标准品，≥99%N,N'-烯酰

肝生长因子激活物(HGFA)ELISA试剂盒十二烷基硫酸钠 99.0%，超纯级巴卡丁 III  分析标准品，≥99%D-葡萄糖一水

肝生长因子(HGF)ELISA试剂盒硫代甜菜碱 8 98%松果菊苷 分析标准品，≥95% 十二烷基硫酸钠(分子生物学级)

肝核因子1β(HNF-1B)ELISA试剂盒硫代甜菜碱10 98%雪上一枝蒿甲素 分析标准品，≥97%聚乙二6000

肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)ELISA试剂盒二甲苯蓝FF 80%雪上一枝蒿乙素 分析标准品，≥98%吐温20

肝素结合EGF样生长因子(HBEGF)ELISA试剂盒10.0μL微量进样器 尖头菊苣酸 分析标准品，≥98%5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸环己盐(X-GLUC)

肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA试剂盒赤藓红B钠盐 85%分析标准品，≥97%曲拉通X-100

肝癌抗原(PHC)ELISA试剂盒柠檬黄  >95%(HPLC)莪术 分析标准品，≥98%胰蛋白胨

肝X受体β(LXRβ)ELISA试剂盒六甲基二硅氧烷 99%α-藏花素 分析标准品，≥98%生物素;D-生物素;维生素 H 辅酶 R

肝X受体α(LXRα)ELISA试剂盒六甲基二硅氧烷 NMR grade, 99.7%天名精内酯酮 23438甘油

甘油三酯(TG)ELISA试剂盒六甲基二硅烷 AR，98%西红花苷Ⅱ 分析标准品，≥95%柠檬酸钠二水；柠檬酸三钠二水

甘油-3-磷酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)ELISA试剂盒六甲基二硅烷 for GC, ≥99.0% (GC)重楼皂苷I 分析标准品，≥97%酸

甘油二酯(DAG)ELISA试剂盒六甲基二硅烷 CP，97%紫堇灵 分析标准品，≥97%明胶

甘露糖受体(MR)ELISA试剂盒1-萘酚 AR，99.0%1-脱氧野尻霉素 分析标准品，≥95%Bacto酵母浸粉(BD原装)
Snu-182细胞爪哇根霉

种属: RhizopusjavanicusTakada

**等级: 1

模式菌株: no

应用领域: 糖化菌

培养基: 17,50

生长条件: 28-30℃

紫色链霉菌

种属: Streptomyces│violaceus

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: no

培养基: 12

生长条件: 28℃

存储条件: 真空冷冻干燥法

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