T98G 细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

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细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

钙腔蛋白(CALU)ELISA试剂盒D-精氨酸盐酸盐  98%银杏内酯 A 分析标准品，≥99%低熔点琼脂糖；具有低凝胶温度的琼脂糖

钙联蛋白(CNX)ELISA试剂盒β-氨酸甲酯盐酸盐 99%染料木苷 分析标准品，≥98%无水磷酸二氢

钙联蛋白(calnexin)ELISA试剂盒β-氨酸 99%染料木苷 from Glycine max (soybean), ≥95% (HPLC)6-苄氨基嘌呤

钙离子通道抗体(VGCC)ELISA试剂盒D-天冬氨酸 98%吉马酮 分析标准品，≥99%纯水(HPLC grade)

钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒N-乙酰-D-亮氨酸 99%龙胆苦苷 分析标准品，≥98%马来酸,顺二酸

钙激活中性蛋白酶6(CAPN6)ELISA试剂盒D-氨酸 98%银杏内酯 J  分析标准品，≥99%硫酸铵

钙激活中性蛋白酶1(CAPN1)ELISA试剂盒D-精氨酸 98%银杏酸(C15:1) 分析标准品，≥99%氯化铯

钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)ELISA试剂盒D-天冬酰,一水 99%银杏酸(C13:0) 分析标准品，≥98% 磷酸氢二钠七水

钙蛋白酶抑素抗体(ACAST-DⅣ)ELISA试剂盒D-a-氨基己二酸 97%分析标准品，≥95%dATP溶液(100 mM)

钙蛋白酶2(M/II)大亚基(CAPN2)(CAPN2)ELISA试剂盒N-乙酰-D-酪氨酸 BR石杉碱乙 分析标准品，≥99%癸酸钠

钙/钙调素依赖性蛋白激酶2(CAMK 2)ELISA试剂盒DL-a-氨基己二酸 96%盐酸去氢骆驼蓬碱 分析标准品，≥98%交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)

富组蛋白(HTN5)ELISA试剂盒DL-半胱氨酸盐酸盐,一水 98%异鼠李素 90%琼脂糖(美仑电泳级)

富组蛋白(histatin-5)ELISA试剂盒DL-胱氨酸盐酸盐 98%异鼠李素 分析标准品，>98%（HPLC)Bis-Tris；双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)

富组氨酸糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒DL-胱氨酸 98%异鼠李素 >98%（HPLC)琼脂糖(Sigma)

富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA试剂盒D-胱氨酸 98%欧前胡素 分析标准品，≥98%植物血凝素

富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61/CCN1)ELISA试剂盒D-环丝氨酸 98%异阿魏酸 分析标准品，≥98%50% 戊二溶液
T98G 细胞谷氨酸棒杆菌

种属: Corynebacterium│glutamicum

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: no

应用领域: 产L-色氨酸。

培养基: CM0002

生长条件: 28℃

意大利游动放线菌

种属: Actinoplanes│italicus

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: Type strain;

培养基: 0011

生长条件: 28℃
培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

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