大鼠巩膜上皮细胞

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实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

补体因子B前体(pre-CFB)ELISA试剂盒二氧化铱 Ir 86%富马酸二甲酯 99%柠檬酸二铵,柠檬酸氢二铵

补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒铱粉 99.99% metals basis己二酸二乙酯 CP,99.0%乳酸钙五水(>98%,USP)

补体片断5b(C5b)ELISA试剂盒铱粉 99.9% metals basis己二酸二乙酯 AR,99.5%2'-脱氧胸苷-5'-一磷酸二钠盐

补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒三氯化铱  试剂级,Ir>52%磷酸三辛酯 98%卫茅(>99%，分子生物学级)

补体片断4b(C4b)ELISA试剂盒四氯化铱(IV) 水合物 Ir 48.0 - 55.0 %磷酸三辛酯 分析标准品2-氯乙基膦酸(>90%,植物级)

补体片断3b(C3b)ELISA试剂盒氯亚铂酸 AR磷酸三辛酯 99%硝酸铁九水

补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒醋酸钯 AR，Pd 46.0 - 48.0 %腺嘌呤盐酸盐 98.5% (HPLC)松三糖

补体片段4d(C4d)ELISA试剂盒氧化钯 Pd ≥85% 腺嘌呤 98%聚乙二20000

补体片段3d(C3d)ELISA试剂盒二溴化钯 Pd 40 % 腺嘌呤磷酸盐 99%对甲苯磺酸钠

补体片段3c(C3c)ELISA试剂盒氯钯酸 Pd 26.2%6-苄氨基嘌呤 99%高酸钠一水(>97%,BR)

补体片段3b受体(C3bR)ELISA试剂盒氯化钯  Pd 59-60%4-氯-2,5-二甲氧基苯  98%SPDP；N-琥珀酰亚-3-(2-吡啶二硫代)酸酯

补体蛋白9(C9)ELISA试剂盒氯铂酸 98%1,4-二甲氧基苯 99%2-氨基噻唑(>98%，BR)

补体蛋白5(C5)ELISA试剂盒硝酸钯 Pd 18.09 wt. % in nitric acid2,5-二乙氧基苯  97%氯化铈七水

补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒硝酸钯(II) 水合物 Pd ≥39.0%2,5-二甲氧基苯 97%D-阿拉伯糖(标准品)

补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒氢氧化钯 AR,99.99%2,4,5-三氯苯 分析标准品,99%D-阿拉伯糖

补体C5a(C5a)ELISA试剂盒氢氧化钯 20% Pd2,4,5-三氯苯 97%三氯六氨络钴;六氨基氯化钴
大鼠巩膜上皮细胞变色多孔菌

种属: Polyporus│versicolor

提供形式: 斜面培养物

**等级: 1

模式菌株: no

培养基: 0091

生长条件: 28℃

存储条件: 液氮超低温冻结法;矿物油法

Georgeniamuralis

种属: Georgeniamuralis

分离基物: 中世纪的壁画，奥地利

**等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: 模式菌株

培养基: 108

生长条件: 28℃

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