大鼠股动脉平滑肌细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

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细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

酮(MGO)ELISA试剂盒碳酸银 AR,99.0%1,3-二氯烷 分析标准品, ≥99.5% (GC)碱式碳酸镁五水(>98%,BC)

二酸单酰辅酶A(malonyl CoA)ELISA试剂盒氯金酸钠 金含量,48% 2-氨基-6-氯吡啶 97%二氧化锰(>97.5%,BC)

二(MDA)ELISA试剂盒磷酸银 银含量, 77.0 % 2-氨基-4-氯吡啶 97%1,3－二苯基脲(>98%,BR)

氨酸转氨酶/谷转氨酶(ALT/GPT)ELISA试剂盒二氯四氨钯 Pd ≥43.0%2-氨基-6-甲氧基吡啶 97%聚乙二600

别孕烯酮/3α,5α-四氢孕酮(AP/3α,5α-THP)ELISA试剂盒四氨合氯化铂 水合物 98%2-溴-6-氨基吡啶  98%普鲁士兰(>98%,BS)

表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒四（三苯基膦）钯(0) 99.8% metals basis, Pd 9.0%5-溴噻吩-2-磺酰氯 97%派洛宁B(Ind)

表皮活化肽因子(CAPF)ELISA试剂盒三苯基膦氯化铑 RH 11.1%5-溴噻吩-2-磺酰  97%5-溴-4-氯-3-吲哚基-N-乙酰-beta-D-氨基半乳糖苷

表皮生长因子样结构域蛋白7(EGFL7)ELISA试剂盒虫草素  分析标准品，99%（HPLC）叔丁基异酸酯 97%岩藻黄质；褐藻素

表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒总银杏酸(C13:0,C15:1,C17:2,C15:0,C17:1) ≥90%3-溴-2-基吡啶 98%乙酸钡(>99%,BR)

表皮角蛋白(EK)ELISA试剂盒6-氯-1-己 95%3-氯基异酸酯  96%苯甲酸酐(>99%,BR)

表面膜球蛋白M(mIgM)ELISA试剂盒辛二 99%邻氯苯异酸酯 98%Brij 58

表面膜球蛋白D(mIgD)ELISA试剂盒辛二酸 99%间氯苯异酸酯 98%硫酸钴七水(>99%,BR)

表面膜球蛋白A(mIgA)ELISA试剂盒N-氨酰甲基乙磺酸 99%环己基异酸酯  98%二硫代乙酰(>98%,BR)

表面活性蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒4-氨基-3-肼基-5-巯基-1,2,5-三唑(用于的测定) 99%4-氯-2-吡啶甲酸 98%脱氧核糖核酸酶 II

表面活性蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒琼脂糖 for biochemistry 4-氯吡啶-2-甲酸甲酯 98%高粘度羟乙基纤维素

表达于SiSo系的受体结合型肿瘤抗原(RCAS1)ELISA试剂盒3-氨基-9-乙基咔唑  95%5-氯噻吩-2-磺酰 97%L-天冬氨酸钠一水
大鼠股动脉平滑肌细胞嗜热链球菌

种属: Streptococcus│thermophilus

分离基物: 酸奶

提供形式: 斜面培养物；冻干物

**等级: 1

模式菌株: no

应用领域: 乳品发酵

培养基: 6

伤寒沙门氏菌

种属: Salmonella│typhi

提供形式: 冻干物

**等级: 2

模式菌株: no

应用领域: 噬菌体分型用 Vi 42　　　9,12,Vi　d　-

培养基: CM0051

生长条件: 37℃
培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

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