大鼠角质形成细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

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细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

白介素1受体相关激酶1(IRAK1)ELISA试剂盒盐酸吡哆 99%4，4'-二（9-咔唑）联苯 98%磷酸氢钙二水(>98%,BR)

白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒1,4-哌二乙磺酸二钠盐 BC2,5-二(氯甲基)- 1-甲氧基-4- (2-乙基已氧基)-苯 98%碳酸铈

白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒1,4-哌二乙磺酸倍半钠盐 99%2-溴-9-芴酮 96%胰凝乳蛋白酶原 A

白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒并五苯 98%9,9-二辛基-2,7-二溴基芴 97%汽巴蓝

白介素1β转换酶(ICE)ELISA试剂盒 对磷酸二钠 六水合物 培养级, ≥98%9,9-二己基-2,7-二溴芴 97%DEAE葡聚糖

白介素1β前体(Pro-IL-1β)ELISA试剂盒对磷酸二钠 for enzyme immunoassay,≥99.0%3-癸基噻吩 98%氟啶酮(>98%,植物级)

白介素1β前体(pro-IL1B)ELISA试剂盒钠 AR，98.0% 9，9-二甲基-2，7-二溴芴 98%组(>98%,BC)

白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒磺二甲氧嘧啶 98%2,7-二溴芴 98%海

白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒D-(+)-海藻糖 二水合物  from Saccharomyces cerevisiae, ≥99%2,6-二甲基-γ-吡喃酮 99%麦芽磷酸化酶, 硫酸铵悬浮液

白介素1Rα(IL-1Rα)ELISA试剂盒三(羟甲基)甲基甘氨酸 99%2,7-二溴芴酮 96%草酮(>95%,植物级)

白介素19(IL-19)ELISA试剂盒三(羟甲基)甲基甘氨酸 99.5%2,6-二甲基-4H-4-亚吡喃基二 98%4-甲基伞形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷

白介素18结合蛋白(IL-18BP)ELISA试剂盒3,3′,5,5′-四甲基联苯 98%3-己基噻吩 98%粘酸(>98%，BC)

白介素18(IL-18)ELISA试剂盒3,3′,5,5′-四甲基联苯 ≥99%(HPLC)2-甲氧基-5-(2′-乙基已氧基)对苯二甲 98%N,N-二乙基对苯二硫酸盐

白介素17F(IL-17F)ELISA试剂盒3,3′,5,5′-四甲基联苯 standard for GC, ≥99.0% (GC)N,N′-二苯基-N,N′-(1-萘基)-1,1′-联苯-4,4′-二（NPD） 99.萘酚AS-MX磷酸酯(>98%，BC)

白介素17B(IL17B)ELISA试剂盒Tris乙磺酸 99%3-辛基噻吩 98%苯肼(>98%,BC)

白介素17A(IL-17A)ELISA试剂盒三(羟甲基)氨烷盐酸盐 99%6,13-五并苯醌 99%硫酸氢(> 99%，BC)
大鼠角质形成细胞苏云金芽胞杆菌

种属: Bacillus│thuringiensis

分离基物: 1-5cm土壤

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: no

应用领域: 科研研究

培养基: 0002

乌斯怀亚海单胞菌

种属: Marinomonas│ushuaiensis

分离基物: 水样/近海海水

提供形式: 斜面培养物

**等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: 模式菌株

培养基: 471
培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

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