大鼠骨髓肥大细胞

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实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： ��相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)ELISA试剂盒3-[(3-胆固氨基)二甲基氨基]-1-磺酸 98%吡啶-3，4-二羧酸 98%次硝酸铋(>98%,BR)

胞浆球蛋白(CIg)ELISA试剂盒2-环己基乙磺酸 ≥99.0% (T)2,6-吡啶二甲 97%碳酸酐酶>3000U/mg

伴侣蛋白10(CPN10)ELISA试剂盒4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑 98%4-甲苯磺酰异酸酯 96%羧肽酶 B >170 U/mg

半乳糖凝集素7(Gal-7)ELISA试剂盒9，9-二甲基-2，7-二溴芴 98%2-(三氯乙酰)吡咯 99%碳酸钴(II)(>98~102%,BR)

半乳糖凝集素3(Galectin3)ELISA试剂盒二硫苏糖 99%盐酸多巴 98%硝酸铜三水(>99%,BR)

半乳糖(Galactose)ELISA试剂盒二硫苏糖 用于分子生物学, ≥99%（±）-α-烟酸酚2'-脱氧脱氧胸苷-5'二磷酸三钠盐

半胱氨酰白三烯(CysLTs)ELISA试剂盒二硫苏糖 用于电泳, ≥99%反二酸 CP，99.0%半乳糖氧化酶(酶活：> 30 U/mg，BC)

半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒1,8-二氮-9-芴酮 99%碳酸胍 99%3-吲哚酸(>99%,植物级)

板层素相关多肽2亚型α(TMPO)ELISA试剂盒N,N'-二环己基-4-吗啉脒 98%异抗坏血酸钠 98%草酸亚铁二水(>99%,BR)

瘢痕性天疱疮抗体(CP)ELISA试剂盒DNA酶 ≥300 Kunitz units/mg protein三氧化二锑 SP硝酸镧六水(>99%,BR)

白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA试剂盒3,3'-二氨基联苯 99%三氧化二锑 99.99% metals basis氯化铅(>99%,BR)

白血病抑制因子(LIF)ELISA试剂盒3,3'-二氨基联苯 97%三氧化二锑 AR，99.5%柠檬酸锂四水(>98%,BR)

白酯酶(LE)ELISA试剂盒2,7-二溴芴酮 96%三氧化二锑 99.9%，平均粒径：0.7 µm4-甲基伞形酮酰-beta-D-吡喃糖苷

白调节素(LR)ELISA试剂盒2,6-二氯酚靛钠盐 AR三氧化二锑 99.999% metals basis4-甲基伞形酮酰-Β-D-吡喃葡糖酸苷

白球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)ELISA试剂盒3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠 99%三氧化二锑 CP，99%4-甲基伞花基磷酸钠三水

白抗原DR(HLA-DR)ELISA试剂盒 3,3'-二氨基联苯四盐酸盐水合物 98%β-氨酸乙酯盐酸盐 98%萘(>98%，BC)
大鼠骨髓肥大细胞达松维尔拟诺卡氏菌达松维尔亚种

种属: Nocardiopsis│dassonvillei subsp. dassonvillei

提供形式: 冻干物

**等级: 1

模式菌株: yes

应用领域: 模式菌株

培养基: 0038

生长条件: 28℃

羊布氏菌

种属: Brucella│melitensis

提供形式: 冻干物

**等级: 3

模式菌株: no

应用领域: **布氏P.I.抗原用于人　　粗糙　　　　突变株,强毒株

培养基: CM0112

生长条件: 37℃

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