大鼠纤维环细胞

实验材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml烧杯2个；
3、50ml离心筒2个 

4、培养皿1个，细胞培养瓶1个 

5、1ml ，200μl移液器各1支；枪头盒2个；无菌玻璃搅拌棒1个 

6、细胞计数板1块； 

7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把； 

8、酒精灯1台； 

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细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

冻存培养基：

冻存细胞时必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO 或者甘油等冷冻保护剂。还可使用专门配制的完全冻存培养基。

1）细胞冻存培养基是一种用于哺乳动物细胞的即用型完全冻存培养基，其所含胎牛血清和牛血清比例经过优，可改善细胞活力以及解冻后的细胞复苏效果。 

2）冻存培养基是一种化学成分确定的、无蛋白、无菌冻存培养基，含10% DMSO，适用于多种干细胞和原代细胞 (黑色素细胞除外) 的冻存。 

E3泛素蛋白连接酶TRIM68(TRIM68)ELISA试剂盒AR,99.5%反,反-2,4-庚二烯 90%加拿大香脂

D-乳酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒CP,99.5%三硫酮 ≥99%, FG正己酸(>98%，BR)

D二聚体(D2D)ELISA试剂盒GR,99.8%4-羟基-3-甲氧基苯甲 98%己内酰(>98%，BR)

DNA损伤诱导转录因子4样蛋白(DDIT4/RTP801)ELISA试剂盒PT,99.8%六氯酮 99%羧肽酶 Y >50 U /mg

DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)ELISA试剂盒光谱级2-异基-4-甲基噻唑 98%蓖麻油

DNA甲基转移酶1(DNMT1)ELISA试剂盒用于和昆虫培养，≥99.5% (T)3-甲基-1-丁硫 97%1,1-环己基二乙酸

DnaJ同源亚科B成员1(DNAJB1/DNAJ1/HDJ1/HSPF1)ELISA试剂盒for HPLC, ≥99.5% (AT)甜瓜 80%反式-1,2-环己二四乙酸(>98%，BR)

Dickkopf相关蛋白1(DKK1)ELISA试剂盒用于植物培养, ≥99.5%2-甲基庚酸  98%乙酸纤维素

Dickkopf 3(DKK3)ELISA试剂盒USP香草酸甲酯 99%乙酸铈(>99%，BR)

Dickkopf 1(DKK1)ELISA试剂盒≥99.999% (metals basis)4-甲硫基-4-甲基-2-戊酮 99%硫酸铈四水(>99%，BR)

DAB2互作蛋白(DAB2IP)ELISA试剂盒农残级, ≥99.5%4-甲基-4-巯基-2-戊酮 98%碳酸铯(>99%，BR)

C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)ELISA试剂盒用于分子生物学, ≥99.5% (AT)3-甲硫基-1-己 99%滂天蓝(~50%,BS)

C型钠尿肽(CNP)ELISA试剂盒99.99% metals basis3-巯基-1-己 98%氯铵-T三水(>98%,BR)

C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒氯化 GR,99.8%3-甲基-2--1-硫 98%卡拉唑黑E(>70%,BS)

C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒氯化 AR,99.5%2-甲基-3-呋喃硫 95%氯金酸三水

C多肽(CP)ELISA试剂盒氯化 CP,99.5%2-甲基四-3-硫 97%氯铂酸六水
大鼠纤维环细胞弗劳地拘橼酸杆菌

种属: Citrobacter│freundii

提供形式: 其他

**等级: 3

模式菌株: no

培养基: CM0051

生长条件: 37℃

存储条件: -80℃冰箱冻结法

小肠结肠炎耶尔森氏菌

种属: Yersinia│enterocolitica

提供形式: 冻干物

**等级: 2

模式菌株: no

应用领域: 血清学分群(型)　41,42　生物1

培养基: CM0116

生长条件: 37℃
培养细胞冻存方案：

以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案，必须参阅针对具体细胞的产品说明书。 

1.配制冻存培养基，于2°C至8°C下储存，直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。

2.冻存贴壁细胞时，利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需完全培养基重新悬浮细胞。

3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度，计算冻存培养基需要量。

4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液，不要搅动细胞沉淀。

注：离心速度和时间取决于细胞种类。

5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀，将其调整至该细胞适合的活细胞密度。

6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时，应不时轻轻混合细胞，使其保持均匀的细胞悬液状态。

7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞，使温度每分钟大约降低1°C。或者，将装有细胞的冻存管放入冻存盒中，然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。

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