柱式动物DNA提取试剂盒（柱式动物DNAout）

产品特点：

1、不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

 一管式植物DNA提取试剂盒（一管式植物DNAout）" " 50次"

 一管式病毒DNA提取试剂盒（一管式病毒DNAout）" " 50次"

 柱式病毒DNA提取试剂盒（柱式病毒DNAout）" " 50次"

 柱式植物DNA提取试剂盒（柱式植物DNAout）" " 50次"

 柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，PCR级（柱式动物线粒体DNAout）" " 50次"

 柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，测序级（柱式动物线粒体DNAout）" " 15次"

 柱式植物RNA提取试剂盒（柱式植物RNAout）（不含DNA酶）" " 50次"

 柱式病毒RNA提取试剂盒（柱式病毒RNAout）" " 50次" 柱式病毒RNA-DNA双提试剂盒（柱式病毒DNA-RNAout）" " 50次"

天净沙RNase型（原固相RNase剂）" " 250 mL"

天净沙RNaseB型（原液相RNase）" " 1.5 mL"

 天净沙RNase剂C型（原气相RNase）" " 120 mL"

 柱式动物RNA提取试剂盒（柱式动物RNAout）（柱式Trizol）" " 50次"

 PCR级甜菜碱溶液，5M" " 1.5 mL"

菌体内**0mL

精提酵母tRNA溶液B（Carrier RNA），5mg/mL 1.5 mL

柱式植物RNA提取试剂盒2.0（柱式植物RNAout 2.0）（含DNA酶) 50次

" Tris饱和酚-氯仿-异戊醇混合液（DNA提取用）（25:24:1）" " 250 mL"

" 样本保存液含染料（粉红色）" " 2.5L"

" 样本保存液（不含染料）" " 2.5L"

" 样本保存液含染料（橙黄色）" " 2.5L"

" 非灭活型病毒样本保存液（非细胞培养用，橙黄色）" " 2.5L"

细胞游离胆固醇毛地黄皂苷法 DIGITONIN 高氯酸萘醌 PAN 染色试剂盒 测定

冰冻切片总胆固醇高氯酸萘醌 PAN 染色试剂盒 测定

特殊石蜡切片总胆固醇高氯酸萘醌 PAN 间接染色试剂盒 测定

细胞总胆固醇高氯酸萘醌 PAN 染色试剂盒 测定

冰冻切片中性脂质油红O染色试剂盒 测定

特殊石蜡切片中性脂质油红O间接染色试剂盒 测定

细胞中性脂质油红O染色试剂盒 测定

冰冻切片中性脂质苏丹黑染色试剂盒 测定

特殊石蜡切片中性脂质苏丹黑直接染色试剂盒 测定

特殊石蜡切片中性脂质苏丹黑间接染色试剂盒 测定

细胞中性脂质苏丹黑染色试剂盒 测定

冰冻切片中性脂质尼罗红染色试剂盒 测定

特殊石蜡切片中性脂质尼罗红直接染色试剂盒 测定

特殊石蜡切片中性脂质尼罗红间接染色试剂盒 测定

细胞中性脂质尼罗红染色试剂盒 测定

冰冻切片胆色素普歇 Pouchet 染色试剂盒 测定

石蜡切片胆色素普歇 Pouchet 染色试剂盒 测定

柱式动物DNA提取试剂盒（柱式动物DNAout）细胞糖原高碘酸希尔 PAS 法染色试剂盒 测定

石蜡切片透明质酸染色试剂盒 测定

石蜡切片网硬蛋白 RETICULIN 染色试剂盒 测定

细胞黑色素 MELANIN 染色试剂盒 测定

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

产品留言

标题

联系人

联系电话

内容

验证码

点击换一张

注：1.可以使用快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,请您留下您的详细联系方式!