柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，测序级（柱式动物线粒体DNAout）

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
LEIBOVITZ’S L15培养基1/10升（片剂）游离甲状腺素（FT4）ELISA试剂盒--动物，人

ISCOVE’S MDM培养基1/10升（片剂）L-赖氨酸乙酯

GRACE’S 昆虫培养基1/10升（片剂）人葡萄糖激酶（GCK）ELISA试剂盒,GCK ELISA

干细胞检测试剂专题小鼠α甘露糖苷酶（α Manase）ELISA试剂盒,

名称规格小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子（vWF）ELISA试剂盒,

胚胎干细胞（ES）基础培养基500毫升小鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物（PAP）ELISA试剂盒,

小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）完全培养基500毫升抗糖蛋白抗体（GP）ELISA试剂盒--动物，人

胚胎干细胞培养生长因子5毫升百日咳素（PT）ELISA试剂盒--动物，人

胚胎干细胞基质胶溶液10毫升血吸虫（schistosoma）ELISA试剂盒--动物，人

胚胎干细胞补充培养基100毫升轮状病抗原（RV Ag）ELISA试剂盒--动物，人

人体胚胎干细胞条件培养基100毫升钙调素（CAM）ELISA试剂盒--动物，人

人体胚胎干细胞完全培养基100毫升小鼠P选择素（P-Selectin/CD62P）ELISA试剂盒,

小鼠胚胎干细胞完全培养基100毫升小鼠β内酰酶抑制剂（BLI）ELISA试剂盒,

大鼠胚胎干细胞完全培养基100毫升小鼠游离甲状腺素（FT4）ELISA试剂盒,

滋养细胞法胚胎干细胞繁殖试剂盒10次小鼠补体片断5a（C5a）ELISA试剂盒,
柱式动物线粒体DNA提取试剂盒，测序级（柱式动物线粒体DNAout）ABCD1/CCL22  嗜酸粒趋化蛋白22抗体艾氏剂 分析标准品（剧品）

ABCB5  ATP结合蛋白家族5抗体二乙基二硫代氨酸铵 高纯级

ABCB6  ATP结合蛋白家族6抗体乙酰辅酶A三锂盐 95%

ABCF1  ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体4-氮杂苯并咪唑 99%

ABCG1  三磷酸腺苷结合盒亚家族G1抗体氯化乙酰硫代胆碱 99%

ABCG2  三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体10-壬基吖啶橙溴化物 荧光级

ABCG4  ABC膜转运蛋白抗体阿脲，四水  98%

c-Abl   非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体甾酮 98%

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