Pandemic2009H1N1 流感病毒 HA 基因荧光PCR检测试剂盒

产品名称：Pandemic2009H1N1 流感病毒 HA 基因荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99889
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-Phospho-Rb (Ser780)/FITC 荧光su标记磷suan化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-Guinea IgG Whole serum 兔抗豚鼠IgG抗血清Multi-class aibodies： 1ml

KB抑制蛋白抗体 Ai-IKB β 0.2ml

Rabbit ai-Bovine IgG whole serum 兔抗IgG抗血清 1ml

phospho-FANCA (Ser1149) 英文名称： 磷suan化范可尼贫血组蛋白A抗体 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-PTPRA(Tyr798) 磷suan化酪氨suan磷suanmeiα抗体  0.1ml

Rabbit Ai-Guinea IgG Whole serum 兔抗豚鼠IgG抗血清Multi-class aibodies： 1ml

Iegrin Alpha3 整合suα3抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-ADH/AVP 抗/血管升压su抗体Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-cdc25A (Ser292) 磷suan化细胞分裂周期蛋白25抗体  0.1ml

核快红染色液-浅红色 6ml Sigma原料

VCP 英文名称： 含缬酪肽蛋白抗体 0.1ml

phospho-Dynamin 1 (Ser774) 英文名称： 磷suan化mei动力蛋白1抗体 0.1ml

Ai-ADH/AVP 抗/血管升压su抗体Multi-class aibodies： 0.2ml

STIL 英文名称： 中断位点蛋白STIL抗体 0.2ml

ELMO1 英文名称： 吞噬细胞运动蛋白1抗体 0.2ml

鼠抗人促甲状腺su单克隆抗体 Ai-TSH 0.1ml

Ai-TRF1/FITC 荧光su标记端粒结合蛋白1抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-IRF3 (Ser396) 磷suan化干扰su调节因子3  0.1ml

Alpha-Synuclein 核突触蛋白(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
Pandemic2009H1N1 流感病毒 HA 基因荧光PCR检测试剂盒醋suan锰水丹参tongIIA-磺suan钠Borrelia burgdorferi RFLP基因分析试剂盒

锰屑(>99%,BR)丹参tongIToxoplasma gondii RFLP基因分析试剂盒

锰粉(>99%,BR)二氢丹参tongITrypanosoma congolense RFLP基因分析试剂盒

6-(马来酰亚基)己suan琥珀酰亚酯隐丹参tongHepatitis B virus RFLP基因分析试剂盒

神经氨suanmei(≥10 units/ mg )丹参su钠Human cytomegalovirus （HCMV）RFLP基因分析试剂盒

乙suan镍水(>98%,BC)冬凌草甲suhuman herpesviruses RFLP基因分析试剂盒

尼罗红(>95%,BS)Q10C. albicans RFLP基因分析试剂盒

N-苯基脲(>97%,BR)粉防己C. glabrata RFLP基因分析试剂盒