呼吸道腺病毒荧光PCR检测试剂盒

产品名称：呼吸道腺病毒荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99919
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-phospho-ERK1(Thr197/Thr202) /FITC 荧光su标记磷suan化原活化蛋白激mei1/2抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-Goat IgM/Gold 金标记兔抗羊IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 2ml

成纤维细胞生长因子受体3抗体 Ai-FGFR3 0.1ml

Goat Ai-Mouse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的羊抗小鼠IgG 0.1ml

FOXD2 英文名称： 叉头蛋白D2抗体 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-Stathmin (Ser16) 磷suan化原癌基因蛋白18抗体  0.1ml

Rabbit Ai-Goat IgM/Gold 金标记兔抗羊IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 2ml

LIFR/CD118 peptide 白血病抑制因子受体抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-AIF 调亡诱导因子抗体Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-c-Abl(Tyr89) 磷suan化非受体酪氨suan激meic-Abl抗体  0.1ml

品名  备注

VCAM-1 英文名称： 血管内皮细胞粘附分子抗体 0.1ml

phospho-Dnmt1(Tyr399) 英文名称： 磷suan化DNA甲基转移mei1抗体 0.1ml

Ai-AIF 调亡诱导因子抗体Multi-class aibodies： 0.1ml

SPO11 英文名称： 减数分裂重组蛋白SPO11抗体 0.2ml

EV71 polyprotein 3D 英文名称： 肠道病毒71型/手足口病病毒抗体 0.2ml

生精细胞凋亡相关基因4抗体 Ai-TSARG4 0.2ml

Ai-TREML2/TLT2/FITC 荧光su标记兔抗人、大、小鼠髓系细胞触发受体样转录因子2抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-IRF7 (Ser471/472) 磷suan化干扰su调节因子7抗体  0.1ml

Socs 1 (suppressor of cytokine signaling 1) 细胞激mei信号-1抑制剂(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
呼吸道腺病毒荧光PCR检测试剂盒马来suan二甲酯(>98%，BR)漆黄su NF kappa B p65（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

草suan二甲酯(>98%，BR)苦玄参IA NF kappa B p50（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

丁二suan二甲酯(>99%,BR)苦玄参IA Rho（-A.-B.-C）（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

二甲tong钠盐(>97%,BR)芦荟 TRAIL（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

N,N-二异基乙(>98%，BR)白术内酯Ⅰ EGFR（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

二苯烷(>98%，BR)白术内酯Ⅱ IGF-I（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

二苯甲(>98% (HPLC),BR)白术内酯III IGF-II（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

直接蓝71(≥50%,BR)蟾灵 PDGFR-alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）