坏死梭杆菌荧光PCR检测试剂盒

产品名称：坏死梭杆菌荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99922
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
PAP ELISA Kit 大鼠前列腺suan性磷suanmeiMulti-class aibodies： 48T

单抗 单抗Multi-class aibodies：

Rhesus aibody Rh FRK/PTK5 胃肠道相关酪氨suan激mei抗体(蛋白酪氨suan激mei5)  0.2ml

AcSDKP(Mouse N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro) ELISA Kit 小鼠N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯suan 96T

Neurocan 英文名称： 神经粘蛋白抗体 0.1ml

AFAP1L2 英文名称： AFAP1L2抗体 0.2ml

单抗 单抗Multi-class aibodies：

E.coli O6 (Escherichia coli O6) E.coli O6大肠杆菌菌体蛋白Multi-class aibodies： 0.5mg

吸引su抗体 Ai-ATRN 0.1ml

Rhesus aibody Rh Phospho-EGFR (Tyr1172) 磷suan化表皮生长因子受体抗体  0.1ml

M199培养液 250ml 国产

ZNF323 英文名称： 锌指蛋白323抗体 0.1ml

DPPA2 英文名称： 多能发育相关基因2抗体 0.1ml

吸引su抗体 Ai-ATRN 0.1ml

ZBTB43 英文名称： 锌指蛋白297B抗体 0.2ml

DMPK 英文名称： 肌强直性营养蛋白激mei抗体 0.2ml

重组膜粘连蛋白-5(人)抗体 Ai-Annexin V 0.1ml

Ai-TORC1/CRTC1/FITC 荧光su标记环腺suan应答元件结合蛋白转录共激活因子TORC1抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-ERK1(Thr202/Tyr204)+ERK2(Thr183/Tyr185) 磷suan化原活化蛋白激mei1/2抗体  0.1ml

Defensin Beta1 防御suβ1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg
坏死梭杆菌荧光PCR检测试剂盒二茂铁圣草su-7-0-葡萄糖甙 IL-16（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

反苯环盐suan盐；单氧化mei(MAO)抑制剂圣草次 IL-17（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

黄suan(>96.5%，BS)圣草酚 IL-18（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

40%氟suan水溶液(39.0~41.0%,BC)草乌甲su IL-19（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

甲合次硫suan氢钠(>98%，BC)L-4-羟基异亮氨suan ERK 1（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

suan性品红钙(>60%，BS)亚麻木酚su ERK 2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

加拉铵(>98%,BR)α-倒捻子su ERK 3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

D-氨基葡萄糖硫suan钠盐β-倒捻子su ERK 5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）