禽脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒

产品名称：禽脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99956
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-Resistin/FITC 荧光su标记抵抗su抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

PACAP(1-38 Peptide) 腺suan环化mei激活肽 1-38(全蛋白)Multi-class aibodies： 0.5mg

肺耐药相关蛋白抗体 Ai-LRP/MVP 0.1ml

SNF5 英文名称： 转录调控激活蛋白SNF5抗体 0.1ml

CT112 英文名称： /抗原112抗体 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-PKM2 (Tyr105) 磷suan化丙tongsuan激meiM2抗体  0.1ml

PACAP(1-38 Peptide) 腺suan环化mei激活肽 1-38(全蛋白)Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-Tau protein/FITC 荧光su标记微管相关蛋白抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

AQP1(Aquaporin1) 水通道蛋白-1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

基质细胞衍生因子-1抗体 Ai-SDF-1/CXCL12 0.1ml

Sema3A 英文名称： 臂板蛋白3A抗体 0.1ml

UBR5 英文名称： E3泛su蛋白连接meiEDD抗体 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-MEF2D(Ser180) 磷suan化肌细胞特异性增强因子2D抗体  0.1ml

AQP1(Aquaporin1) 水通道蛋白-1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Nuclear protein stromal aigen 1 英文名称： 粘结蛋白SA1抗体 0.2ml

Phospho-EGFR (Ser1045) 英文名称： 磷suan化表皮生长因子受体抗体 0.1ml

可溶性载质转运蛋白22A17抗体 Ai-Slc22A17 0.2ml

Ai-Tenascin/TN /FITC 荧光su标记细胞粘合su抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-MCAM(Tyr641) 磷suan化黑色su瘤细胞粘附分子CD146抗体  0.1ml

Beta-arrestin 1/2(beta-arrestin 1/2) β-抑制蛋白1/2抗原Multi-class aibodies： 0.5mg
禽脑脊髓炎病毒荧光PCR检测试剂盒橙黄Ⅳ矮壮su标准品  CAS号： 999-81-5 250mg铜蓝蛋白活性比色法定量检测试剂盒

橙黄Ⅰ乙酯杀螨 标准品  CAS号： 510-15-6 100mg血液α－淀粉mei活性CNPG3比色法定量检测试剂盒

邻苯二酚紫地茂散标准品  CAS号： 2675-77-6 100mg体液α－淀粉mei活性CNPG3比色法定量检测试剂盒

N-苯基（钒试剂）百菌清标准品  CAS号： 1897-45-6 250mg总胆汁suan（TBA）定量检测试剂盒

1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(AR，≥98%)绿麦隆标准品  CAS号： 15545-48-9 250mg血清/血浆总胆汁suanmei偶联反应比色法定量检测试剂盒

1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(AR,90.0%)枯草隆标准品  CAS号： 1982-47-4 250mg组织总胆汁suanmei偶联反应比色法定量检测试剂盒

蓝VF氯苯灵 标准品  CAS号：101-21-3 250mg体液总胆汁suanmei偶联反应比色法定量检测试剂盒

(IND)死蜱 标准品  CAS号：2921-88-2 250mg血清/血浆总胆汁suanmei循环比色法定量检测试剂盒