人外周血AFP mRNA表达水平荧光PCR检测试剂盒

产品名称：人外周血AFP mRNA表达水平荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99971
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-OPG /FITC 荧光su标记骨保护蛋白/护骨su抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-pig IgG/HRP 辣根过氧化物mei标记兔抗猪IgGMulti-class aibodies： 0.1ml

即刻早期基因抗体 Ai-c-fos 0.1ml

Rabbit Ai-horse IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗马IgM 0.1ml

FGF12 英文名称： 成纤维细胞生长因子12抗体 0.2ml

Rhesus aibody Rh PKC epsilon 蛋白激meiC抗体  0.1ml

Rabbit Ai-pig IgG/HRP 辣根过氧化物mei标记兔抗猪IgGMulti-class aibodies： 0.1ml

IL-18/IGIF(Ierleukin-18) 白细胞介su-18/干扰suγ诱导因子Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-ACTH (7-23) 促肾上腺皮质ACTH (7-23)抗体Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-CDK7 (Thr170) 磷suan化周期su依赖性激mei7抗体  0.1ml

羊IgG干粉 10mg/50mg/100mg 国产

WDR68 英文名称： WDR68蛋白抗体 0.1ml

DEC-205/CD205/Ly75 英文名称： 细胞抗原75抗体 0.2ml

Ai-ACTH (7-23) 促肾上腺皮质ACTH (7-23)抗体Multi-class aibodies： 0.1ml

StAR 英文名称： 促黄体诱导蛋白抗体 0.2ml

Emx1 英文名称： 有脊椎动物脑发育相关蛋白Emx1抗体 0.2ml

CXCL10趋化因子10/干扰su诱导蛋白10抗体 Ai-CXCL10/IP-10 0.1ml

Ai-VCAM-1/CD106 /FITC 荧光su标记血管内皮细胞粘附分子抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-HER2(Tyr1221/1222) 磷suan化HER2受体抗体  0.1ml

CD34 CD34抗原(细胞表面的唾液粘蛋白)Multi-class aibodies： 0.5mg
人外周血AFP mRNA表达水平荧光PCR检测试剂盒砷标准溶液（1000μg/ml,溶剂:1mol/L硝suan）安果 标准品  CAS号：2540-82-1 250mg组织乳suan脱氢mei（LDH）总活性mei动力比色法定量检测试剂盒

砷标准溶液（100mg/L,溶剂：微量硫suan）Fosetyl-aluminum 标准品  CAS号：39148-24-8 250mg血液乳suan脱氢mei（LDH）总活性mei动力比色法定量检测试剂盒

砷标准溶液（100µg/mL,基体：1%HNO3）Fosfomycin Calcium 标准品  CAS号：25992-22-7 100mg乳suan脱氢mei（LDH）总活性mei动力比色法定量检测试剂盒

砷标准溶液（0.500μg/g,基体:0.2%(v/v)H2SO4,K+2.2mg/L,Na+23mg/L,Cl-37mg/L）唑磷 标准品  CAS号：98886-44-3 30mg植物乳suan脱氢mei（LDH）总活性mei动力比色法定量检测试剂盒

标准溶液（1000μg/ml,溶剂：水）氯苯酞标准品  CAS号： 87-41-2 100mg 乳suan脱氢mei（LDH）总活性终点比色法定量检测试剂盒

标准溶液（100µg/mL,基体：水）呋线威 标准品  CAS号：65907-30-4 250mg肌suanmei（CK）活性mei动力比色法定量检测试剂盒

铋标准溶液（1000μg/ml,溶剂:1.5 mol/L HNO3）Geamycin-2,5-sulfate hydrate 标准品  CAS号：1405-41-0 250mg组织肌suanmei（CK）活性mei动力比色法定量检测试剂盒

铋标准溶液（1000μg/ml,溶剂:1.0 mol/L HNO3）赤霉su 标准品  CAS号：28281 100mg体液肌suanmei（CK）活性mei动力比色法定量检测试剂盒