人细小病毒B19荧光PCR检测试剂盒

产品名称：人细小病毒B19荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99973
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-PGRN /FITC 荧光su标记颗粒蛋白前体抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Mouse Ai-rabbit IgM/Gold 金标记小鼠抗兔IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 2ml

Fas死亡结构域相关蛋白 Ai-FADD 0.1ml

Donkey Ai-Goat IgG/FITC FITC标记的驴抗羊IgG 0.3ml

Factor VIIIa light chain 英文名称： 8/第八/第八因子相关抗原轻链抗体 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-SYT1(Thr202) 磷suan化突触结合蛋白1抗体  0.1ml

Mouse Ai-rabbit IgM/Gold 金标记小鼠抗兔IgM (10nm/15nm)Multi-class aibodies： 2ml

sIL-2R 大鼠可溶性白介su-2受体Multi-class aibodies： 48T

Ai-DcR2/CD264/TNFRSF10D 诱捕受体2抗体Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh NEK3 丝氨suan/苏氨suan蛋白激meiNek3抗体  0.2ml

Human Glycated Albumin,GA ELISA Kit 人糖化白蛋白 96T

Twinkle 英文名称： 共济失调蛋白8抗体 0.2ml

COG1 英文名称： COG1蛋白抗体 0.1ml

Ai-DcR2/CD264/TNFRSF10D 诱捕受体2抗体Multi-class aibodies： 0.2ml

SCP3 英文名称： 联会复合体蛋白3抗体 0.1ml

EGF 英文名称： 抗表皮生长因子抗体 0.1ml

“蒙”蛋白又称“波克曼”蛋白抗体 Ai-Pokemon 0.2ml

Ai-Stra8/FITC 荧光su标记视黄suan激活基因8抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-Mst1(Thr183)/Mst2(Thr180) 磷suan化蛋白激meiMST抗体  0.1ml

G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein) G蛋白(鸟suan结合蛋白)(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
人细小病毒B19荧光PCR检测试剂盒镉标准溶液（0.100μg/g,基体:K+ 2.2mg/L,Na+ 23mg/L,Ca2+ 39mg/L,Mg2+ 11mg/L,0.5mol/L HNO3）吡氟氯禾灵 标准品  CAS号：69806-34-4 250mg总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒

钴标准溶液（500mg/L,溶剂：1%盐suan）七氯 标准品  CAS号：76-44-8 100mg组织总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒

钴标准溶液（100(20℃)µg/mL,基体: 1%HNO3）六氯苯 标准品  CAS号：118-74-1 250mg食物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒

铈标准溶液（1000μg/ml,基体：10%HNO3）六那唑 标准品  CAS号：79983-71-4 100mg体液总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒

镝标准溶液（1000μg/ml）氟铃脲 标准品  CAS号：86479-06-3 100mg 总抗氧化能力（TAC）终点比色法定量检测试剂盒

溴代异辛烷（标准品）环tong 标准品  CAS号：51235-04-2 100mg超氧化物阴离子比色法定量检测试剂盒

铕标准溶液（1000μg/ml）噻螨tong 标准品  CAS号：78587-05-0 100mg组织超氧化物阴离子比色法定量检测试剂盒

氟离子（F-）标准溶液（500mg/L,溶剂：水）氟蚁腙 标准品  CAS号：67485-29-4 100mg血液超氧化物阴离子比色法定量检测试剂盒