铜绿假单胞菌荧光PCR检测试剂盒

产品名称：铜绿假单胞菌荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P99988
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-Transthyretin /FITC 荧光su标记转甲状腺su蛋白抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原) Multi-class aibodies： 0.5mg

酪氨suan激meiB抗体 Ai-Trk B 0.1ml

Serum amyloid A 4 protein 英文名称： 血清淀粉样蛋白4抗体 0.2ml

EphB1+EphB2+EphB3+EphB4 英文名称： 酪suan蛋白激mei受体B1+B2+B3+B4抗体 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-IRS1(Ser312) 磷suan化胰岛su受体底物-1抗体  0.1ml

SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原) Multi-class aibodies： 0.5mg

HER2 receptor()(erbB-2 isoform 2 receptor N-Terminus) c-erbB-2受体抗原(N端)Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-phospho-4EBP1(Ser64) 磷suan化4E结合蛋白1抗体Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh Phospho-Cofilin(Ser3) 磷suan化丝切蛋白抗体  0.1ml

羊抗人IgG、IgM、IgA-纯化抗体 1mg/10mg 国产

XKR1 英文名称： 膜转运蛋白XK抗体 0.2ml

DOK6 英文名称： 胞浆接头蛋白Dok6抗体 0.2ml

Ai-phospho-4EBP1(Ser64) 磷suan化4E结合蛋白1抗体Multi-class aibodies： 0.1ml

SNAIL 英文名称： Snail蛋白抗体 0.1ml

eIF1 英文名称： 真核翻译起始因子1抗体 0.2ml

转移抑制蛋白1抗体 Ai-CD82/KAI1 0.1ml

Ai-VHL/FITC 荧光su标记一种抑制因子抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-GAP43(Ser41) 磷suan化神经生长相关蛋白43抗体  0.1ml

CGA(Chromogranin A) 嗜铬粒suA抗原Multi-class aibodies： 0.5mg
铜绿假单胞菌荧光PCR检测试剂盒异菌脲标准溶液(100μg/ml,u=4%)莠定 标准品  CAS号：250mg冻切片黑色su去色试剂盒

异氯磷(标准品)PICOLINAFEN 标准品  CAS号：137641-05-5 250mg石蜡切片网硬蛋白（RETICULIN）染色试剂盒

1,4-二氯苯-d4(标准品)杀鼠tong 标准品  CAS号：83-26-1 250mg冻切片网硬蛋白（RETICULIN）染色试剂盒

2,2,3,3,4,4,5,56,6-十溴代-1,1-联苯(标准品)增效 标准品  CAS号：100mg石蜡切片透明质suan染色试剂盒

二环戊二烯环氧化物(97%)戊草净 标准品  CAS号：24151-93-7 250mg冻切片透明质suan染色试剂盒

1,2-二氯乙烷(standard for GC,>99.9%(GC)) 标准品  CAS号：23103-98-2 250mg石蜡切片糖原高suan希尔（PAS）法染色试剂盒

1,2-二氯乙烷(for HPLC,≥99.9%) 甲基嘧啶磷 标准品  CAS号：29232-93-7 250mg冻切片糖原高suan希尔（PAS）法染色试剂盒

1,2-二氯乙烷标准熔液(1.00mg/ml,基体：甲)多氧霉su 标准品  CAS号：19396-06-6 100mg糖原高suan希尔（PAS）法染色试剂盒