猪链球菌荧光PCR检测试剂盒

产品名称：猪链球菌荧光PCR检测试剂盒
产品货号:FS-01P100009
操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
Ai-TCRG/FITC 荧光su标记抗T细胞受体γ抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Leptin receptor(long) 瘦su受体(长)(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg

可溶性糖蛋白C抗体 Ai-SGC 0.2ml

Phospho-Syk (Tyr323) 英文名称： 磷suan化非受体型酪suan蛋白激mei抗体 0.1ml

phospho-EPO Receptor (Tyr485) 英文名称： 磷suan化红细胞**su受体抗体 0.1ml

Rhesus aibody Rh Phospho-MEF2A (Ser408) 磷suan化肌细胞增强因子2抗体  0.1ml

Leptin receptor(long) 瘦su受体(长)(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg

SOD1(superoxide-dimutase-1) 超氧化物歧化mei1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-BMPR-1A 骨成型蛋白受体1A抗体Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh PERP/p53 apoptosis effector related to PMP22 p53凋亡相关作用蛋白PMP22抗体  0.1ml

Connexin-43 浓缩液 0.1ml 进口分装

TSEN2 英文名称： tRNA剪接内切mei2抗体 0.2ml

Caveolin-3 英文名称： 细胞质膜微囊蛋白-3抗体 0.1ml

Ai-BMPR-1A 骨成型蛋白受体1A抗体Multi-class aibodies： 0.2ml

Duck salmonella 英文名称： 鸭沙门氏菌抗体 0.2ml

phospho-EGFR (Ser1142) 英文名称： 磷suan化表皮生长因子受体抗体 0.1ml

少突细胞髓磷脂糖蛋白抗体 Ai-Omgp 0.1ml

Ai-SMC1/FITC 荧光su标记染色体结构维持蛋白质1抗体IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-NMDAR2B (Tyr1474) 磷suan化谷氨suan受体2B抗体  0.1ml

CD133 Ai-gen 造血干细胞抗原(多肽抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
猪链球菌荧光PCR检测试剂盒芘(标准品)3 1-萘乙suan  标准品  CAS号：0.5g20％Formalin固着液

苯乙烯(标准品)301 三苯基氯化锡  标准品  CAS号：0.25g10％中性Formalin固着液

苯乙烯标准溶液(1000μg/ml)301 三苯基氢氧化锡  标准品  CAS号：0.25g20％中性Formalin固着液

(-)-盐suan东莨菪(标准品)301 薯瘟锡 标准品  CAS号：0.25gsuan性福尔马林固着液（Formalin-Acetic Acid）  

硫标准溶液(1000ug/ml，基体:1%HCl)307 啶嘧磺隆 标准品  CAS号：10mg乙福尔马林固着液（Formalin-Alcoholic）

水质二氧化硫(甲法)（水剂）标样(溶剂：0.4-0.6mg/L,分析标准品)319 氟虫脲 标准品  CAS号：0.1g4％多聚甲固着液

十烷(标准品)32 禾草灭  标准品  CAS号：0.25g4％中性多聚甲固着液

三氯乙烯标准溶液(1000μg/ml,溶剂：甲)327 伏草隆 标准品  CAS号：0.25g2％戊二固着液（Glutaraldehyde）