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产品资料

HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)

HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)
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  • 产品名称:HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)
  • 产品型号:A-PJ1040
  • 产品展商:抚生
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简单介绍
HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)公司正在出售的产品:M-MLV 4 Two-Step RT-PCR Kit逆转录两步法通用试剂盒
产品描述


商品属性:


货号

规格

产品名称

A-PJ1040-1000U

1000U

HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)

储存条件:


HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)储存:-20℃ 可保存 3 年。

产品介绍:


末端转移酶(TdT)是一种不依赖于模板的 DNA 聚 合酶,催化脱氧核苷酸结合到 DNA 分子的 3’羟基端。带有 突出、凹陷或平滑末端的单双链 DNA 分子均可作为 TdT 的 底物,加尾长度可达 5~300nt。本酶经电子重构架技术筛选, 使其可以在 45°C 高温下反应,从而避免因 DNA 二级结构造 成的加尾效率下降。 该酶广泛用于 DNA 的 3’末端添加同聚物、利用修饰碱 基(如 ddNTP,DIGdUTP)标记 DNA 3’末端、TdT 介导的 dUTP 缺口末端标记技术(细胞凋亡的原位检测)等试验。
活性定义:37 ℃ 60 分钟内,催化 1nmol dNTP 加入到多聚核苷酸 3’羟基末端中所需的酶量定义为 1 个活性单位
热失活:75°C 20min。

 

注意事项:


1、适量 EDTA 可使 Terminal Transferase 的活性丧失。
2、金属离子螯合剂,较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对 Terminal Transferase 活性具有抑制作用。
3、DNA 末端 mol 数的计算,长度为 100bp 的 DNA:1pmol末端 DNA=0.33ng。
HotStart RAPA3G DNA Polymerase 为第三代 DNA 聚合酶,具有 5’-3’外切酶活性,不具有 3’-5’外切酶活性,其 具有*高的杂质耐受性(对乙醇、胍盐、肝素具有极高的耐 受性),因此对于纯度较差的 DNA 模板,该酶仍然可以获得 理想的实验结果。RAPA3G DNA 聚合酶为化学法修饰的 HotStart 版本,其在 50℃以下 100%无活性,只有 95℃条件 下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有 效抑制非特异性 PCR 扩增,极大的提高了 PCR 扩增特异性 和灵敏度。该酶配有独特的反应缓冲液,可在宽范围中得到 良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。

使用说明:

1. 按照如下组分配制 50 μl PCR 反应体系:
注意:(1)在 50 μl 的 PCR 反应体系中 HotStart RAPA3GDNA Polymerase 的用量可在 0.1-0.5 μl 进行调整。(2)Mg2+的浓度通常在 2-4 mM 时可获得理想的扩增结果。
2. qPCR 扩增程序用两步法:
 Stage 1: 95℃ 5min
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 30s 25-40 cycles
注意:由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶,必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的活性,该热启动步骤不能缩短时间。
3. 常规 PCR 三步法程序:
 Stage 1: 95℃ 5min
 Stage 2: 95℃ 10s
 50-60℃(退火) 20s
72℃ 4kb/min 25-40 cycles
Stage 3: 72℃ 5min
注意:由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶,必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的活性,该热启动步骤不能缩短时间。

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