商品属性:
货号
规格
产品名称
A-PJ1080-25T
25T
血清血浆microRNA提取试剂盒
A-PJ1080-100T
100T
储存条件:
血清血浆microRNA提取试剂盒储存:室温可保存 2 年。
产品介绍:
血清血浆 miRNA 提取试剂盒是目前提取小 RNA(<200nt)操作步骤*简单、重复性*好、小 RNA 产 率*高的方法之一。使用该试剂盒通过一步上柱即可获得高 纯度 miRNA,可在 10min 左右完成小 RNA 的提取;且使用 该试剂盒提取的小 RNA(Small RNA)中,长度在 15~200nt 范围的 RNA 在 95%以上,基本不含有大 RNA 和 DNA,可 直接用于后续的反转录、Northern 杂交、测序等应用。
操作方法:
自备试剂:异丙醇、乙醇、75%异丙醇、2ml EP 管 操作方法: (1) 向 1.5ml EP 管中加入 800μl Serum/Plasma miRNAReagent。将 300μl 血清或血浆样本加入到上述 800μlmiRNA Reagent A 中,用腕力混匀 30s,室温放置 5min。 (2) 13,000rpm 离心5min,将上清约 1ml 吸入到新的 2ml EP管中。加入 1ml 异丙醇,上下颠倒混合均匀。 (3) 将上述溶液分三次加至吸附柱中(每次约 700μl),13,000rpm 离心 15s,倒掉过柱液。 (4) 向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次,13,000rpm离心 15s,倒掉过滤液。 (5) 向吸附柱中加入 500μl 无水乙醇洗涤一次,13,000rpm离心 15s,倒掉过滤液。 (6) 吸附柱 13,000rpm 空离心 2min,去掉残留的乙醇。 (7) 将吸附柱放入到新 1.5ml EP 管中,室温放置 2min,使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入 30μl RnaseFree H2O,室温静置 2min,13,000rpm 离心 2min,洗脱产物即为提取的 miRNA。 常见问题汇总: (1) 由于血清血浆中的 miRNA 含量极低,提取的 miRNA 浓度通常在 5 ng/μl 以下,因此难以用常规的 NanoDrop 测量浓度,建议直接使用 10 μl 进行下游反转录。由于本试剂盒提取的是小 RNA,该浓度下的 miRNA Copy 数足以进行下游检测。 (2) 由于血清血浆中 miRNA 的含量低,为了获得更可靠的实验数据,建议使用特异性和灵敏度更好的 TaqMan 探针法进行 miRNA 的下游检测。本试剂盒提取的 miRNA 并不限于其它检测方法和用途,包括 SYBR Green 法检测、二代测序、芯片等检测领域。 (3) 血清血浆 TaqMan miRNA 反转录试剂盒为血清血浆专用,不可用于细胞和组织的 miRNA 检测实验。
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