金担子素A,Aureobasidin A（AbA）
编码
品名
规格
单位
北京华越洋生物
GX71-1
金担子素A
1mg
瓶
GX72-5
5mg
金担子素A产品性质 产品描述冰袋运输。4℃保存。
分子式（Formula）
C60H92N8O11
分子量（Molecular weight）
1100
纯度（Purity）
≥95%
熔点（Melting point）
155-157℃
操作步骤（抗AbA的酵母转化系统）
1） 加入0.5 ml过夜培养的酵母到50 ml YPD培养基中（配方：1L液体培养基含有10g yeast extract，20g polypeptone， 20g D-glucose；固体培养基另外加入2%琼脂；）。
2） 30℃培养约6小时，测定OD660为1～2。使用二倍体时，测定OD660为2～4。
3） 1,000×g离心5分钟。
4） 用10 ml Solution A（配方：100 mM Lithium acetate，10 mMTris-HCl pH7.5，1 mM EDTA）悬浮沉淀，1,000×g离心5分钟。
5） 用Solution A重悬沉淀，直到OD660为150。
6） 在管内分取100 μl细胞悬浮液，30℃培养1小时。
7） 加入5μg载体（环状或线性DNA）和150 μg Carrier DNA，100℃加热10分钟，迅速冷却。
注：pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。
8） 加入850 μl Solution B（配方：取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解，需要现用现配），轻轻混匀。
9） 30℃培养30分钟后，42℃培养15分钟。
10）室温放置10分钟。
11）5,000 rpm离心1分钟，用5 ml YPD培养基悬浮沉淀。
12）30℃培养6小时~过夜。
13）5,000~10,000 rpm离心，用1-10 ml 0.9% NaCl悬浮沉淀。
14）在YPD选择培养基平板（含有一定浓度的AbA，依菌株类型而定）上接种100μl细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。
15）挑取阳性转化子，和/或测定转化效率（以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示）。
金担子素A注意事项
1）为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）AbA的*佳工作浓度因宿主细胞不同而有差异，可根据*低抑菌浓度（MIC）来确定。
表1 Aureobasidin对各种酵母菌的*低抑菌浓度
菌株
MIC（μg/ml）
S.cerevisiae
ATCC9763（diploid）
0.2-0.4
SH3328（haploid）
0.1
Sake yeast（diploid）
0.1-0.2
Shochu yeast（diploid）
Beer yeast（triploid or tetraploid）
Baker’s yeast（diploid）
Schizo.pombe
JY-745（monoploid）
C.albicans
TIMM-0136（diploid）
0.04
C.tropicalis
TIMM-0324（diploid）
0.08
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